- 1、本文档共6页,可阅读全部内容。
- 2、原创力文档(book118)网站文档一经付费(服务费),不意味着购买了该文档的版权,仅供个人/单位学习、研究之用,不得用于商业用途,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等,侵权必究。
- 3、本站所有内容均由合作方或网友上传,本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺!文档内容仅供研究参考,付费前请自行鉴别。如您付费,意味着您自己接受本站规则且自行承担风险,本站不退款、不进行额外附加服务;查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档,您可以点击 这里二次下载。
- 4、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等,请点击“版权申诉”(推荐),也可以打举报电话:400-050-0827(电话支持时间:9:00-18:30)。
- 5、该文档为VIP文档,如果想要下载,成为VIP会员后,下载免费。
- 6、成为VIP后,下载本文档将扣除1次下载权益。下载后,不支持退款、换文档。如有疑问请联系我们。
- 7、成为VIP后,您将拥有八大权益,权益包括:VIP文档下载权益、阅读免打扰、文档格式转换、高级专利检索、专属身份标志、高级客服、多端互通、版权登记。
- 8、VIP文档为合作方或网友上传,每下载1次, 网站将根据用户上传文档的质量评分、类型等,对文档贡献者给予高额补贴、流量扶持。如果你也想贡献VIP文档。上传文档
ICS67.120.30B50
DB22
吉林省地方标准DB22/T2911—2018
贝类中副溶血性弧菌检测微滴数字PCR法
DeterminationofVibrioParahemolyticusinshellfish-dropletdigitalPCRmethod
2018-11-12发布2018-12-30实施
吉林省市场监督管理厅发布
I
DB22/T2911—2018
前言
本标准按照GB/T1.1-2009和GB/T20001.4-2015给出的规则起草。本标准由长春海关(原吉林出入境检验检疫局提出并归口)。
本标准起草单位:长春海关(原吉林出入境检验检疫局验检疫技术中心)、吉林大学中日联谊医院、吉林农业大学。
本标准主要起草人:聂丹丹、聂海英、王宁宁、杜佳剑、曲辉、彭勃、王玮琳、刘金华、罗雁非、洪晓坤。
1
DB22/T2911—2018
贝类中副溶血性弧菌检测微滴数字PCR法
警示——使用本标准的人员应有正规实验室工作的实践经验。本标准并未指出所有可能的安全问题。使用者有责任采取适当的安全和健康措施,并保证符合国家有关法规规定的条件。
1范围
本标准规定了贝类中副溶血性弧菌检测微滴数字PCR法的试剂和材料、仪器和设备、样品、试验步骤和试验数据处理与防止污染措施。
本标准适用于贝类中副溶血性弧菌检测。
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
GB4789.1-2016食品安全国家标准食品卫生微生物检验总则
GB4789.7-2013食品安全国家标准食品微生物学检验副溶血性弧菌检验
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB19489实验室生物安全通用要求
GB/T19495.3转基因产品检测核酸提取纯化方法
WS/T230-2002临床诊断中聚合酶链反应(PCR)技术的应用
3原理
微滴式数字PCR平台通过产生微小油包水体系实现反应体系的分割,根据副溶血性弧菌的旋转酶(gyrase)特异性基因序列对贝类中副溶血性弧菌进行鉴定。经PCR扩增后,根据泊松分布原理及阳性微滴的个数与比例即可得出靶分子的起始拷贝数或浓度,实现对副溶血性弧菌的快速定性检测。
4试剂和材料
除另有规定外,所有试剂均为分析纯。实验用水符合GB/T668中二级水的要求。
4.1裂解液,成分包括:2%CTAB(cetyltrithylammoniumbromide,十六烷基三甲基溴化铵),100
mmol/LTris(trishydroxymethylaminomethane,三羟甲基氨基甲烷),1.4mol/LNaCl,20mmol/LEDTA(ethylenediaminetetraaceticacid,乙二胺四乙酸),用HCl调至pH8.0。
4.2酚/氯仿/异戊醇(25:24:1,v/v/v)。4.3氯仿。
4.4异戊醇。
4.5无水乙醇。4.6异丙醇。
2
DB22/T2911—2018
4.770%乙醇。
4.82×ddPCR预混液。
4.9副溶血性弧菌旋转酶(gyrase)基因引物和探针4.10上游引物:5’-CGGTAGTAAACCCACTGTCAG-3’
下游引物:5’-GTTTCAGGCTCACCATGACG-3’
探针:5’-(FAM)-ATCCATCGTGGCGGTCATATCCAC-(TAMRA)-3’
4.11菌株:副溶血性弧菌阳性标准菌株。
5仪器和设备
5.1微量移液器:0.1μL~2.5μL,1μL~10μL,2μL~20μL,10μL~100μL,20μL~200μL,100μL~1000μL。
5.2高速冷冻离心机(12000r/min)。5.3涡旋混合器。
5.4核酸蛋白分析仪或紫外分光光度计。5.5微滴生成仪。
5.6PCR仪。
5.7微滴读数系统。
6样品
6.1样品的采集按照GB4789.1-2016中3.1的规定实施。6.2样品前处理按照GB4789.7-2013的规定执行。
7试验步骤
7.1增菌培养
按照GB4789.7-2013的规定执行
您可能关注的文档
- DB22T 2937-2018 卫生计生行政许可操作规程.docx
- DB22T 2936-2018 口腔正畸临床邻面去釉技术规程 .docx
- DB22T 2935-2018 家居常规保洁服务质量规范.docx
- DB22T 2932-2023 医养结合机构老年人服务规范 .docx
- DB22T 2929-2018 转基因玉米种cry3类基因定性检测 PCR法.docx
- DB22T 2928-2018 食用向日葵“二比空”生产技术规程 .docx
- DB22T 2926-2018 盐碱地酿造高粱优质高产生产技术规程.docx
- DB22T 2925-2018 碱性稻米品种盐碱地生产技术规程.docx
- DB22T 2924-2018 半干旱地区玉米轻简化滴灌栽培技术规程.docx
- DB22T 2922-2018 鸡传染性支气管炎病毒检测 荧光RT-PCR法.docx
- DB22T 2909-2018 H5N8亚型禽流感病毒HA和NA基因荧光RT-PCR检测方法 .docx
- DB22T 2908-2018 长白山林蛙油的测定 高效液相色谱法.docx
- DB22T 2906-2018 区域性天然林生态系统植被群落地理网格调查技术规程 .docx
- DB22T 2905-2018 胡桃楸植苗造林技术规程.docx
- DB22T 2904-2018 水曲柳人工林大径材培育技术规程.docx
- DB22T 2902-2018 木雕粘贴画技术规程.docx
- DB22T 2900-2018 以水灭火机械化森林消防专业队伍装备配置.docx
- DB22T 2899-2018 稻田养殖大鳞副泥鳅技术规范 .docx
- DB22T 2898-2018 洛氏鱥苗种培育技术操作规程.docx
- DB22T 2894-2018 传染性造血器官坏死病防控技术规范.docx
文档评论(0)