毒理学实验基础 .ppt

2.各组动物数毒理学安全性评价试验各组动物数取决于很多因素，如实验目的和设计，要求的敏感度、实验动物的寿命、生殖能力，经济的考虑及动物的可利用性。各组动物数的设计应考虑到统计学的要求。第55页，共98页，星期日，2025年，2月5日3.试验期限某些试验(如致畸试验和多代生殖试验)的试验期限是由受试实验动物物种或品系而决定的。而其他毒性试验的期限在某种程度上由定义所决定。如急性毒性是一次或1天内多次染毒观察14天，亚慢性毒性试验规定为染毒持续至实验动物寿命的10％，对大鼠和小鼠为90天，对狗应为1年。慢性毒性试验／致癌试验一般规定为持续至实验动物寿命的大部分。又可分为两类，即规定试验期限的试验，或直到最敏感的组死亡率达到某一水平(通常为80％)的试验。第56页，共98页，星期日，2025年，2月5日二、体外毒理学试验设计此处简要讨论在遗传毒理学体外试验共同考虑的几个问题。1．测定受试物溶解性应该测定受试物在试验介质中的溶解性。已注意到在试验系统暴露期内，受试物的溶解性可能改变。因此，在试验开始和结束时评价溶解性是有意义的。溶解性限度就是出现沉淀的最低浓度。第57页，共98页，星期日，2025年，2月5日2．试验最高剂量的推荐对可溶性受试物浓度高于10mmol/L时可因高渗透压在哺乳动物细胞引起损伤或人工假象，对细菌则无此影响。由于受试物的分子量并不一定知道(如聚合物或混合物)，因此，在大多数情况下，可溶性受试物的试验上限应该是：(1)对哺乳动物细胞为10mmol/L或5mg/ml。(2)对细菌试验为5mg/平板。当受试物供应困难或非常昂贵(如生物药剂)，最高剂量低于10mmol/L或5mg/ml(或／平板)是可以接受的。第58页，共98页，星期日，2025年，2月5日对于有毒性的受试物，最高浓度在细菌试验中应该是明显显示毒性的剂量，对哺乳动物细胞试验最高剂量，基因突变试验应达到10％～20％存活率，而染色体畸变和UBS试验应达到50％存活率。对于没有适当溶剂，完全不溶的受试物，则可以按5mg/平板或10mmol/L(5mg/ml)进行实验以检测杂质的致突变性。或者，采用生理盐水提取物进行实验。第59页，共98页，星期日，2025年，2月5日3.代谢活化代谢活化常规使用多氯联苯1254预处理的雄性成年大鼠肝匀浆90000g离心上清液(S9)，及相应的辅因子(NADPH再生系统)。由于各国禁用限用多氯联苯，可用苯巴比妥和β-萘黄酮联合诱导制备S9(El1iott，1992)。对体外哺乳动物细胞试验，还可利用大鼠肝原代培养细胞等作为代谢活化系统。第60页，共98页，星期日，2025年，2月5日4.阳性对照阳性对照的剂量应选择其剂量-反应的直线部分，并且构成历史性资料(历史性对照)，并以其作为实验质量控制的措施之一。5.重复由质控良好的实验得到明确的阴性结果和阳性结果，不强调要求重复。可疑结果则应重复实验，最好改变剂量范围／剂量间隔、改变S9浓度或改变实验方法进行重复。第61页，共98页，星期日，2025年，2月5日第五节实验动物的染毒和处置本节简要介绍在动物实验前的实验动物准备、受试物的准备、染毒途径和方法、动物处死和生物标本采集的基本内容。第62页，共98页，星期日，2025年，2月5日一、动物实验前的准备实验动物在购进之后，应雌雄分开饲养。一般应进行5～7天的检疫，在此期间应多次观察动物，及时剔除不健康的动物。观察期结束，将实验动物按实验设计的要求进行标记和分组。第63页，共98页，星期日，2025年，2月5日实验动物的标记方法对啮齿动物常用染色法，可用苦味酸(黄色)、品红(红色)的酒精饱和溶液在动物被毛上染色，不同的颜色和染色部位表示不同的编号，可标出1～99号。由于被毛上颜色会逐步消失，故需重复染色。对啮齿动物还可用剪耳法标记。对狗等大动物一般用挂牌法。利用耳号钳在动物的耳朵上打号，每剪一个耳缺代表一个数字，两个耳朵的耳缺相加所得数字为该动物编号。耳号钳第64页，共98页，星期日，2025年，2月5日实验动物分组的原则要求所有的动物分配到各剂量组和对照组的机会均等，避免主观选择倾向，减少偏性，以保证结果的准确可靠。正确的分组方法是随机分组。实验动物按性别、体重顺序编号，然后利用统计学的随机数字表，按完全随机分组法或配伍组随机分组法，将实验动物分配到各剂量组和对照组。然后应计算各组实验动物体重的均值和标准差，必要时可将实验动物适当调组，以使各组实验动物体重的均值的差别不超过允许范围。第65页，共98页，星期日，202