青霉素和头孢菌素 (2).ppt

*四、头孢菌素C的分离纯化工艺头孢菌素C(简称头C)为氨基酸，通常为内铵盐，水溶性很大，化学稳定性较差，并且在生物合成过程中常伴随产生性质相近的头孢菌素C(CPC)、脱乙酰氧头孢菌素C(DOCPC)、脱乙酰头孢菌素C(DCPC)和青霉素N等多种头C类似物，这些都给头C的分离纯化带来较大困难。虽然吸附法、溶媒提取法、离子交换法及沉淀法都可用来分离头C，但上述任何一种单一的传统方法，均达不到满意的效果。第29页，共71页，星期日，2025年，2月5日*目前主要采用多种分离纯化方法相结合的生产工艺。即先用大孔网状吸附剂从发酵液中初步分离出头C，然后经离子交换法纯化，最后采用络盐沉淀法进行结晶。第30页，共71页，星期日，2025年，2月5日*(一)发酵液预处理发酵终了时，按头C游离酸计，一般CPC含量为18～20mg／ml，还含有5％～15％的DCPC及微量DOCPC。先使发酵液冷却至15℃以下，再用硫酸酸化至pH2．5～3．0，放置一定时间，使DCPC内酯化而易于与头C分离。然后板框或真空鼓式过滤机过滤，并用水顶洗滤渣。收集、合并滤液和洗液于低温(10℃)下保存。第31页，共71页，星期日，2025年，2月5日*(二)吸附与解吸用大孔网状吸附剂吸附滤液和洗液中的头C。滤液在进入吸附柱之前一定要强调澄明，以免污染树脂。国外常用AmberliteXAD-2、XAD-4及DiaionHP-20等。国产大孔网状吸附剂有SKC-02、SIP-1300、312等，其性能与XAD-4相似。头C的最适吸附pH应为2．5～3．0，XAD-4的吸附容量为15～20g／L树脂。吸附完毕，需用2～4倍吸附体积去离子水洗涤，除去SO42-等阴离子，以免干扰后工序离子交换树脂的纯化。然后用15％～25％乙醇，丙酮或异丙醇水溶液来解吸。收集解吸液收率约为90％。第32页，共71页，星期日，2025年，2月5日*(三)纯化用离子交换树脂纯化解吸液中的头C。头C分子具有两个羧基和一个氨基，由于氨基碱性较弱，不能用阳离子交换树脂处理，用强碱性树脂，吸附虽好，但解吸困难。故采用弱碱性阴离子交换树脂来分离纯化头C，常用AmberliteIRA-68、AmberliteIR-4B及国产医工-82、330等。预先用醋酸溶液处理树脂使成醋酸型，再开始吸附。330树脂对CPC的交换容量为60～80g／L树脂。吸附完毕，用去离子水洗涤树脂，然后以1.5％～2.5％的醋酸钠(钾)水溶液解吸。解吸收率一般也有90％左右。第33页，共71页，星期日，2025年，2月5日*(四)沉淀结晶头C可与二价重金属离子Cu2+、Zn2+、Ni2+、Co2+、Fe2+、pb2+等形成l∶l摩尔比的难溶性络盐微晶沉淀。利用这一原理，在头C二次解吸液中直接进行沉淀结晶。其中以锌盐用得最普遍。将CPC浓度为30～50mg／mL的离子交换解吸液，放入结晶罐中冷却至5℃，加入醋酸锌搅拌使溶解，然后再加入结晶液体积30％的乙醇或丙酮，即逐渐析出头C锌盐微晶沉淀。结晶收率为85％～90％。此法简单，收率也好，但由于重金属盐的选择性较差，需在一定浓度下才能析出络盐结晶，因此，此法只能用于经过纯化后的头C水溶液。第34页，共71页，星期日，2025年，2月5日*(四)沉淀结晶头C锌盐含2分子结晶水[C16H20O8N3SZn·2H2O]，为淡黄色微晶性粉末，不溶于水及氯仿、甲醇、乙醇等有机溶剂，其CPC游离酸，Zn2+及水分三种含量的理论值分别为80．30%、12．69％及6．98％。该工艺的特点是将大孔吸附剂法、离子交换法及沉淀法三者合理地结合起来，扬长避短，使头C的分离纯化在收率与质量上达到较为满意的结果。发酵液至头C锌盐总收率一般为65％～70％。从质量上看，发酵液中CPC的纯度为60％～65％，经过大孔网状吸附剂分离的一次解吸液CPC纯度可提高至75％～80％，在弱碱性树脂离子交换纯化后的二次解吸液CPC纯度已达90%以上。第35页，共71页，星期日，2025年，2月5日*四.头孢菌素类及半合成头孢菌素类（一）天然头孢菌素——头孢菌素C1.结构：头孢菌素C的化学结构中母核是由氢化噻嗪环与β-内酰胺环稠合而成，7位上有D-α-氨基己二单酰胺基侧链。第36页，共71页，星期日，2025年，2月5日*2.稳定性：四、六元环稠合C2、C3双键3.特点：抗菌活性比较低；但对酸比较稳定，可以口服，毒性较小，与青霉素很少或无交叉过敏反应。抗菌谱广，对革兰阴性菌有抗菌活性。第37页，共71页，星期日，2025年，2月5日*4.结构改造：对头孢菌素C进行结构改造，