食品卫生微生物检验的质量控制.pptVIP

食品卫生微生物检验的

质量控制;实验室质量控制标准-

食品微生物检测BG/T27405-2021;人员;仪器设备;试剂与材料;检验方法与质量控制标准;实验室环境监测;食品卫生微生物学检验的

培养基质量控制原那么;培养基的起源与开展;美国Difco公司至今已有100多年历史，早在1895年就开始生产胃酶、胰酶制品，1917年生产脱水培养基。

英国Oxid公司1950年开始商品化生产枯燥培养基。

Difco和Oxid的产品被全球微生物实验室广泛接受，产品达400多种。

我国1958年开始研制枯燥培养基，目前已有50多个生产厂家，商品干粉培养基达200多种。;培养基质量控制的意义;国际通用的培养基质控标准;国内现行的培养基质控标准;培养基实验室配制的根本程序;培养基制备前的准备;贮存时，建立实验室保存有效培养基的目录清单：

--贮存条件(温度、时间)；

--容器密闭性复查；

--首次开封日期；

--内容物的感观检查(粉未的流动性、均匀性、色泽、结块)。

;培养基实验室制备通那么;--采用离子交换器〔去离子〕生产的去离子水，微生物含量较高，这种水在过滤灭菌后仍可能带有细菌生长的抑制因子。所以配置培养基时最好不要使用这种方法生产的去离子水，而应使用蒸馏水。

--盛放蒸馏水的容器最好是由中性材料制成的〔如中性玻璃，聚乙烯等〕，在初次使用前要确认容器中不含有任何抑制因子。;称重和复水

--操作人员的自我防护：注意缓慢操作，必要时佩戴口罩或在通风柜中操作，以防吸入含有有毒物质的培养基粉末。

--严格按产品说明书准确称量。

--称量所需量的脱水培养基，先参加适量的水，充分混合〔注意防止培养基结块〕，然后加水至所需的量。

--尽量在湿度较低的房间中称量，以防止培养基受潮。;溶解和分装

--脱水培养基加水后适当加热，并不停搅拌使其快速溶解，必要时重新溶解。

--含琼脂的培养基在加热前应浸泡几分钟。

--用各种成分制备的培养基应将不同成分分别参加适量的水中，并充分溶解，然后再加水至所需的量。;pH值的测定和调整

--培养基灭菌冷却到25℃时，pH的变化不应超过0.2个单位。

--用稀酸或稀碱〔1mol的NaOH或Hcl〕将其pH调至要所需要求。

--???可反复调pH，否那么会影响培养基的渗透压。

--测定pH的温度为25℃。

--商品化的培养基高压灭菌前后pH可能变化很大，但采用优质蒸馏水或去离子水，灭菌前无需调节pH。;分装

--将配好的培养基分装到适当的容器中，根据不同用途，容器的体积可为培养基的1倍、2倍或3倍。

容器的选择：

--在使用过程中不会释出改变培养基pH的物质。

--不得使用铜锅或铁锅(当培养基的含铜量0.3mg/1000mL时，细菌不易生长。当含铁量0.14/1000mL时，那么防碍细菌毒素的产生)。

--容器应有留有足够的空间(一般至少为培养基总体积1倍以上)。;灭菌

--培养基和试剂应采用湿热灭菌法或过滤除菌。

--亮绿培养基等特定的培养基中含有对光和热敏感的物质，只能煮沸灭菌。煮沸后应迅速冷却，避光保存；

--明胶、血清、糖类等不耐高温的物质，应采用高压锅低温灭菌法/间歇灭菌法灭菌；

--有些试剂那么不需灭菌，可根据相关标准或供给商使用说明直接采用。;湿热灭菌

--高压灭菌一般采用121℃灭菌15分钟。当培养基体积超过1000mL时，要对灭菌条件进行适当的调整，但应按照标准或使用说明的规定进行。

--高压灭菌过程要通过放置到特定位置的热电耦或测试条件进行监测，以保证灭菌的效果。

--灭菌效果的控制是关键。加热后采用适当的方式冷却，以防加热过度。这对于肠道菌培养基和大容器中的培养基等的灭菌十分重要。

;过滤灭菌

--过滤除菌可在真空负压或加压的条件下进行。使用孔径为0.22μm的滤膜或过滤器。

--过滤前先将滤膜和滤垫灭菌。过滤器于121℃下灭菌15min(可以整体灭菌也可以拆卸后灭菌)，灭菌后在无菌条件下组装。

--一些滤膜上附着有蛋白质〔如抗生素〕。为了到达有效过滤，应事先将滤膜用无菌水润湿。;监测

--应对经湿热或过滤灭菌的培养基进行监测，尤其要对pH、色泽、灭菌效果和均匀度等指标进行监测。;添加成分的制备

--制备含有有毒物质的添加成分〔尤其是抗生素〕时应小心操作〔必要时在通风柜中操作〕，防止因粉尘的扩散造成实验人员过敏或发生其他不良反响；

--制备溶液时应小心按产品使用说明操作；不要使用过期的产品；

--抗生素工作溶液应现用现配；批量配置的抗生素溶液分装后冷冻贮存，但解冻后的贮存溶液不能再次冷冻；

--厂商应提供冷冻对抗生素活性影响的有关资料，也可由使用者自行测定。;培养基的使用

--将培养基放到沸水浴中或采用有相同效果的方法〔如高压锅中的蒸汽〕使之融化。

--经过高压的培