线虫的分类鉴定.pptVIP

rDNA-ITS测序后同源性聚类分析的系统进化树（3）PCR-RFLP方法*聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）法的原理是：采用聚合酶链式反应（PCR）扩增目的DNA片段，然后将待检测的DNA片段用限制性内切酶酶切，限制性内切酶识别并切割特异的序列，然后将酶切后的产物进行电泳，再由限制酶图谱分析此段序列的特异切位点，由片段的多样性来比对不同来源基因序列的差异性。PCR技术基本原理PCR技术的基本原理类似于DNA的天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成：①模板DNA的变性：模板DNA经加热至93℃左右一定时间后，使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备；②模板DNA与引物的退火(复性)：模板DNA经加热变性成单链后，温度降至55℃左右，引物与模板DNA单链的互补序列配对结合；③引物的延伸：DNA模板--引物结合物在TaqDNA聚合酶的作用下，以dNTP为反应原料，靶序列为模板，按碱基配对与半保留复制原理，合成一条新的与模板DNA链互补的半保留复制链。重复循环变性--退火--延伸三过程，就可获得更多的“半保留复制链”，而且这种新链又可成为下次循环的模板。每完成一个循环需2～4分钟，2～3小时就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍。到达平台期所需循环次数取决于样品中模板的拷贝。RAPD技术建立于PCR技术基础上,它是利用一系列(通常数百个)不同的随机排列碱基顺序的寡聚核苷酸单链(通常为10聚体)为引物,对所研究基因组DNA进行PCR扩增.聚丙烯酰胺或琼脂糖电泳分离,经EB染色或放射性自显影来检测扩增产物DNA片段的多态性,这些扩增产物DNA片段的多态性反映了基因组相应区域的DNA多态性。RAPD所用的一系列引物DNA序列各不相同,但对于任一特异的引物,它同基因组DNA序列有其特异的结合位点.这些特异的结合位点在基因组某些区域内的分布如符合PCR扩增反应的条件,即引物在模板的两条链上有互补位置,且引物3端相距在一定的长度范围之内,就可扩增出DNA片段.因此如果基因组在这些区域发生DNA片段插入、缺失或碱基突变就可能导致这些特定结合位点分布发生相应的变化,而使PCR产物增加、缺少或发生分子量的改变。通过对PCR产物检测即可检出基因组DNA的多态性。分析时可用的引物数很大,虽然对每一个引物而言其检测基因组DNA多态性的区域是有限的,但是利用一系列引物则可以使检测区域几乎覆盖整个基因组。因此RAPD可以对整个基因组DNA进行多态性检测。放射自显影胶片成像第三节植物病原线虫的分类*一、植物线虫分类的基本概念和内容二、植物线虫的形态分类特征三、植物线虫的分类地位和分类系统概述四、常见植物线虫属的的鉴定特征和一般生物学特性要求：了解植物病原线虫分类的基本概念和内容，掌握植物线虫的形态分类特征，分类地位和分类系统，了解常见植物线虫属的鉴定特征和鉴定方法。一、植物线虫分类的基本概念和内容植物线虫分类的目的和内容主要包括以下几个方面:(1)鉴定：研究区分和确定植物线虫的各个种类，按照国际动物命名法规予以命名，并加以描述，提供正确识别和辨别线虫种类的知识和资料。(2)分类：根据线虫种类之间的异同及亲缘关系，确定其所属的分类阶元层次，制定分类系统。(3)系统学：探寻线虫种类的起缘及其之间的亲缘关系，追溯其进化过程。(4)分类学：狭义的植物线虫分类学是研究植物线虫分类的方法和理论，广义的植物线虫分类学就是研究上述诸内容的一门科学。植物线虫分类的基本概念和内容植物线虫分类学：是运用比较、分析和归纳等方法，依据线虫表达系统发育关系的性状或性状组合，对植物线虫进行鉴定、命名和排序，制定可以反映植物线虫进化过程或阐明各类群内在关系的分类系统，进而揭示植物线虫的起源及各种群之间的亲缘关系，同时不断探索新的分类方法和理论。植物线虫分类鉴定的依据形态学生物化学细胞遗传学鉴别寄主分子生物学二、植物线虫的形态分类特征*形态特征是最直观、最常用的分类特征。但仅仅依靠形态特征难以区别一些种类，特别是一些近缘种。所以有必要使用形态以外的其他性状特征，如遗传学性状、生理生化性状、分子性状以及生态、行为、地理等性状都已开始应用于植物线虫的分类鉴定。形态性状往往明显地反映生物进化、反映物类(或物种)的亲缘关系及生活关系，所以目前植物线虫分类，主要还是以形态性状为基础的形态分类。植物线虫的形态分类特征目前，植物线虫形态分类所依据的特征，主要是外部和内部形态特征。外部形态特征主要