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免疫磁珠分离法488nm激光+-前向散射光检测器荧光检测器电磁场单个细胞被分类进入检测管流式细胞术分离原理示意图E花环沉降法B细胞功能检测T细胞功能检测NK细胞功能检测三、相关功能检测T细胞增殖试验01T细胞介导的细胞毒试验02MHC-肽四聚体技术03淋巴细胞内细胞因子检测04T细胞功能检测母细胞4刺激物5淋巴细胞1DNA合成2分化3细胞变大细胞浆扩大空泡核仁明显核染色质疏松6T淋巴细胞增殖试验淋巴细胞转化的刺激物PHA------T细胞ConA------T细胞PWM------T、B细胞LPS------B细胞非特异性刺激物：异种抗原同种组织抗原特异性刺激物：01形态学检查法023H-TdR掺入法03MTT比色法淋巴细胞转化的检测方法形态学检查法未转化和转化淋巴细胞的形态特征转化的淋巴细胞未转化的淋巴细胞淋巴母细胞过渡型细胞大小(直径μm)12～2012～166～8核大小、染色质增大、疏松增大、疏松不增大、密集核仁清晰、1～4个有或无无有丝分裂有或无无无胞质、着色增多、嗜碱增多、嗜碱极少、天青色浆内空泡有或无有或无无伪足有或无有或无无原理：刺激物37℃56hG1期→S1期合成DNA↑3H-TdR37℃16hDNA-3H-TdR测淋巴细胞内放射量（cpm）计算SI判断淋巴细胞转化程度外周血（T）G0期3H-TdR掺入法评价：该方法敏感性高、客观性强、重复性好、可自动操作；设备昂贵、放射污染。01刺激指数（stimulatingindex，SI）SI=试验管cpm均值/对照管cpm均值023H-TdR掺入法03原理：外周血T细胞PHA发生增殖MTT含蓝色甲颗粒的T细胞MTTPHA有机溶剂测吸光度（A）值计算SI判定细胞增殖结果SI=(SI≧2具有意义)MTT比色法人民卫生出版社第十章免疫细胞的分离和功能检测人民卫生出版社第十章免疫细胞的分离和功能检测第十章

免疫细胞的分离和功能检测目录1外周血单个核细胞的分离和纯化2淋巴细胞及其亚群的分离3吞噬细胞的分离和收集返回总目录01检测：各类免疫细胞及其亚群的数量和功能测定02方法：体外法为主03目的：判断机体免疫状态04意义：探讨疾病的发病机制、发展、预后、疗效05免疫细胞的分离是指将各种参与免疫反应的06细胞从血液或组织中分离出来免疫细胞的分离及检测免疫细胞种类第一节吞噬细胞的分离和收集吞噬细胞的种类﹡大吞噬细胞:即单核-吞噬细胞系统﹡小吞噬细胞:即中性粒细胞特征性标志CD14分离技术Pecoll密度梯度分离法流式细胞仪分离技术免疫磁珠分离法：为目前较常用的方法黏附法12（一）单核细胞的分离一、吞噬细胞的分离免疫磁珠分离法斑蝥敷贴法分离人巨噬细胞动物的巨噬细胞直接从腹腔渗出液中获取巨噬细胞的分离0102RBC血浆(抗凝血)WBCRBC中性粒细胞的分离可从外周血中分离出白细胞聚合物加速沉降法01可从白细胞中分离出纯化的中性粒细胞Ficoll分离法02Ficoll-Hypaque密度梯度离心分离中性粒细胞吞噬细胞的吞噬活动大体分为趋化、吞噬和胞内杀灭作用三个阶段，据此建立相应的检测方法。中性粒细胞功能检测技术巨噬细胞功能检测技术相关功能检测121细胞趋化功能的检测2吞噬功能的检测3杀菌功能的检测（一）中性粒细胞功能检测趋化功能检测——检测细胞运动功能体内试验法：皮肤窗法体外试验法：滤膜渗透法琼脂糖平板法皮肤窗法在受检者前臂屈侧中央3㎜范围内，搔刮皮肤后，用盖玻片压紧固定，在第2，5，8，12，24，36小时各取样一次，染色观察中性粒细胞聚集开始时间、聚集程度等。健康正常人一般2～3h后开始聚集，达50～100个，6小时可达1000个以上。滤膜渗透法原理及技术要点在一特制的分上下两层的小盒，将趋化因子加入下室，待检细胞加入上室，两室用微孔滤膜分隔，37℃温育数小时后，上室的中性粒细胞受下室趋化因子的吸引，由滤膜微孔进入滤膜内，取滤膜清洗、固定、干燥、染色和透明，在高倍镜下观察细胞穿越滤膜的移动距离，从而判断其趋化功能。琼脂糖平板法0102原理及技术要点趋化指数越大，表明中性粒细胞运动功能越强