抗肿瘤药物体内筛选试验基础标准操作专项规程SOP.pdfVIP

抗肿瘤药品体内筛选标准操作规程

概述：

抗肿痛药品是指能够直接杀伤或抑制肿瘤细胞生长或增殖一类药品，作用机制包含抑制

肿痛细胞核或蛋白质合成、干扰大分子物质代谢、|二扰微管系统、抑制拓扑异构酶等。

本操作规程包含和抗肿痛药品中请临床试验和申请上市相关非临床有效性和安全性研

究内容，其中着力强调非临床有效性和安全性之间关联性，和非临床研究和临床试验之间关

联性。意在首先为抗肿瘤药品非临床研究提供技术参考；其次，经过技术要求引导科学有序

研发过程，使中国这类药品研发更趋规范和合理。

本操作规程仅代表现在对抗肿瘤药品非临床研究通常性认以。具体药品非临床研究应在

本指导标准基础上，依据药品本身特点制订研究方案。

研究目标：

建立一套包含抗肿瘤药品体内作用药效学研究和评价体系及对应标准操作规程和抗肿

瘤药品安全性和作用新机制研究。

①有效性研究

抗肿瘤药品有效性研究目标关键在于探索受试物作用机制、作用强度、抗瘤谱等，为以

后安全性评价和临床试验中适应症、给药方案选择提参考信息.

②安全性评价

安全性评价目标关键包含：（1）估算I期临床试验起始剂量：2（）估计药品毒性靶

器官或靶组织：3（）估计药品毒性性质、程度和可逆性；4（）为临床试验方案制订提供参

考。

研究计划：

a（）小鼠急性毒性测试

根据急性毒性测试常规方法，选择昆明种小鼠，经过腹腔注射方法给药,测定体外抗肿

瘤活性突出化合物半数致死量(LDQ,参考给药小鼠体重改变情况，评价化合物急性毒性,

并确定小鼠体内抗肿瘤活性测试给药剂量。

(b)小鼠体内抗肿瘤活性测试

依据动物体内抗肿瘤活性测试标准方法，选择昆明种小鼠，皮下接种肉

瘤S180或肺癌H22瘤株，选择体外活性突出且急性毒性较低化合物，设定适宜

剂量经过腹腔注射方法给药，以临床常见抗肿瘤药品环磷酰胺作为阳性对照药

品，测定肿瘤生长抑制作为体内活性评价指标、

(c)专利保护范围内化合物继续合成

申请保护范围较大专利，合成部分可能含有良好活性新化合物，拓展研究范围，发

活性更强化合物，并申请新发明专利。并可针对具体化合物申请隶属专利，延长高活性化合

物保护期限。

(d)体外抗肿瘤活性广泛筛选

采取MTT法或台盼蓝染色法，测定化合物对多个人肿癖细胞株增殖抑制活性，确定

化合物在不一样瘤株间抗肿瘤活性选择性，为裸鼠模型试验提供依据。

(e)抗肿瘤作用机理深入研究

依据抗肿瘤(f)人癌喋鼠移植瘤模型试验活性化合物作用机理特征，选择微管蛋白

聚合等试验从分子水平确定化合物作用机理：利用人脐静脉血管内皮细胞探讨化合物对内皮

细胞骨架影响及诱导凋亡途经，从细胞水平上说明化合物作用机理。

依据抗肿瘤新药审批措施要求，采取裸小鼠皮下接种模型和/或原位移植瘤模型，以

相对肿瘤增值率和生存时间为指标，确定化合物抗肿瘤活性。

(g)动物体内药品代谢动力学试验

选择在人癌裸鼠移植病模型试验中活性良好化合物，开展动物体内药品代谢动力学

试验，考查化合物吸收、分布、代谢、排泄性质。

(h)动物亚急性，K毒试验

依据抗肿瘤新药审批措施要求，测定动物亚急性、长毒性质，进行药品安全性评价。

基础方法:

①小白鼠灌丹法

以左手捉持小白鼠，使腹部朝上，右手持灌胃器。灌胃器先从小白鼠口角插入口腔内，

然后沿着上颗壁轻轻插入食管，稍感有阻力时（大约灌胃管插入1/2,相当于食管过膈肌部

位），即可推进注射器，进行灌胃（图1）。若注射器推进困难，应重插。若灌胃器误插入

气管给药，可致小白鼠死亡。注药后轻轻抽出灌胃管。此法1次给药量为0.01-0.03nWg。

图1.小白鼠捉持及其胃法

②小白鼠皮下注射法

通常在其背部皮下注射。将其皮肤拉起，注射针刺入皮下，把针尖轻轻左右摆动，易摆

动表已刺入皮下，然后注射药液。拔针时，以手指捏住针刺部位，以预防药液外漏（图2）。

该法对小白鼠1次注射药量为0.01-0.03ml公