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细菌的遗传分析.ppt

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1、RecBCD识别chi序列引发重组保守的8碱基非对称序列大肠杆菌DNA每5-10Kb自然出现一次被recBCD编码的酶所识别刺激重组——重组热点1)chi位点第30页,共74页,星期日,2025年,2月5日2)RecBCD酶的功能①能降解DNA的核酸酶(核酸外切酶Ⅴ)②解旋酶活性③ATP酶活性目标:提供一条含游离3’端的单链区域(RecA可以作用的底物)第31页,共74页,星期日,2025年,2月5日RecBCD酶识别chi序列引发重组含游离3’端的单链第32页,共74页,星期日,2025年,2月5日2、RecA催化单链同化①具有蛋白酶活性②在单链DNA和ATP存在的条件下启动DNA单链和与之互补的双链分子进行碱基配对。单链同化:RecA可使一条DNA单链置换一条双链DNA分子中同源链的反应。单链同化需要的条件:a.必须有一个单链DNA分子区域。b.必须有一个具游离3’端的DNA分子;c.该单链区域和3’端必须位于这两个分子的互补区域中。第33页,共74页,星期日,2025年,2月5日具有游离3’端的单链单链具有游离3’端第34页,共74页,星期日,2025年,2月5日3、Ruv系统解离Holiday连接点RuvA:识别Holliday连接点的结构RuvB:具ATP酶的活性,为分支迁移提供动力。RuvC:具有核酸内切酶活性,可特异识别Holliday连接点。第35页,共74页,星期日,2025年,2月5日第36页,共74页,星期日,2025年,2月5日一、中断杂交实验原理二、中断杂交作图三、重组作图(自学)第四节中断杂交与重组作图第37页,共74页,星期日,2025年,2月5日一、中断杂交实验原理Hfr细胞和F-细胞杂交,基因从Hfr细胞按次序转入F-细胞,可根据基因进入F-细胞的时间和次序制作基因图谱。实验材料Hfr:thr+leu+azistonslac+gal+strsF-:thr-leu-azirtonrlac-gal-strrstrr(F-可以在链霉素培养基上生长)strs(Hfr不能在链霉素培养基上生长)第38页,共74页,星期日,2025年,2月5日实验方法-中断杂交实验两品系在液体培养基里,通气混合培养,定时取样,猛烈搅拌以中断杂交,释稀菌液,在含Str的基本培养基上培养。第39页,共74页,星期日,2025年,2月5日AABBCCDDDDCCB第40页,共74页,星期日,2025年,2月5日二、中断杂交作图实验结果混合时间(min)结果8出现的菌落与F-相同,说明Hfr的基因未进入F-9出现少量的azis菌落,说明azis己从Hfr转移到F-11出现azistons型的F-菌落18出现azistonslac+型的F-菌落24出现azistonslac+gal+型的F-菌落第41页,共74页,星期日,2025年,2月5日随时间推移,具有某一基因的菌落逐渐增加,达到一定频率后就不再变动,而且愈早转入的基因,所达到的频率也愈高。第42页,共74页,星期日,2025年,2月5日实验结果说明:Hfr的DNA从一端开始,以线性方式逐段进入F-,这一端叫原点或O点。O点?azis?tons?lac+?gal+第43页,共74页,星期日,2025年,2月5日时间单位法以转移时间单位(每分钟)作为基因间距单位,可作出Hfr的“染色体”上的基因分布图(基因连锁图)。第44页,共74页,星期日,2025年,2月5日E.coli的连锁群E.coliK12的基因组环形图为100min第45页,共74页,星期日,2025年,2月5日假如让Hfr×F-杂交持续2h后中断杂交,发现一些F-?F+。这说明Hfr的全部基因转移到F-内,排列到最后的F因子才进入F-,使F-?F+。中断杂交实验与重组作图第46页,共74页,星期日,2025年,2月5日原点致育基因配对区致育基因F因子在细菌染色体上有很多插入位点,并且插入的取向不同一个F+品系可以产生很多Hfr品系第47页,共74页,星期日,2025年,2月5日第48页,共74页,星期日,2025年,2月5日几个Hfr菌株的线性连锁群的产生HfrH菌株的基因转移顺序thrprolacpurga

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