细菌的遗传分析.ppt

1、RecBCD识别chi序列引发重组保守的8碱基非对称序列大肠杆菌DNA每5-10Kb自然出现一次被recBCD编码的酶所识别刺激重组——重组热点1）chi位点第30页，共74页，星期日，2025年，2月5日2）RecBCD酶的功能①能降解DNA的核酸酶（核酸外切酶Ⅴ）②解旋酶活性③ATP酶活性目标：提供一条含游离3’端的单链区域（RecA可以作用的底物）第31页，共74页，星期日，2025年，2月5日RecBCD酶识别chi序列引发重组含游离3’端的单链第32页，共74页，星期日，2025年，2月5日2、RecA催化单链同化①具有蛋白酶活性②在单链DNA和ATP存在的条件下启动DNA单链和与之互补的双链分子进行碱基配对。单链同化：RecA可使一条DNA单链置换一条双链DNA分子中同源链的反应。单链同化需要的条件：a.必须有一个单链DNA分子区域。b.必须有一个具游离3’端的DNA分子；c.该单链区域和3’端必须位于这两个分子的互补区域中。第33页，共74页，星期日，2025年，2月5日具有游离3’端的单链单链具有游离3’端第34页，共74页，星期日，2025年，2月5日3、Ruv系统解离Holiday连接点RuvA：识别Holliday连接点的结构RuvB：具ATP酶的活性，为分支迁移提供动力。RuvC：具有核酸内切酶活性，可特异识别Holliday连接点。第35页，共74页，星期日，2025年，2月5日第36页，共74页，星期日，2025年，2月5日一、中断杂交实验原理二、中断杂交作图三、重组作图（自学）第四节中断杂交与重组作图第37页，共74页，星期日，2025年，2月5日一、中断杂交实验原理Hfr细胞和F-细胞杂交，基因从Hfr细胞按次序转入F-细胞，可根据基因进入F-细胞的时间和次序制作基因图谱。实验材料Hfr：thr+leu+azistonslac+gal+strsF-：thr-leu-azirtonrlac-gal-strrstrr（F-可以在链霉素培养基上生长）strs（Hfr不能在链霉素培养基上生长）第38页，共74页，星期日，2025年，2月5日实验方法-中断杂交实验两品系在液体培养基里，通气混合培养，定时取样，猛烈搅拌以中断杂交，释稀菌液，在含Str的基本培养基上培养。第39页，共74页，星期日，2025年，2月5日AABBCCDDDDCCB第40页，共74页，星期日，2025年，2月5日二、中断杂交作图实验结果混合时间（min）结果8出现的菌落与F－相同，说明Hfr的基因未进入F－9出现少量的azis菌落，说明azis己从Hfr转移到F－11出现azistons型的F－菌落18出现azistonslac＋型的F－菌落24出现azistonslac＋gal＋型的F－菌落第41页，共74页，星期日，2025年，2月5日随时间推移，具有某一基因的菌落逐渐增加，达到一定频率后就不再变动，而且愈早转入的基因，所达到的频率也愈高。第42页，共74页，星期日，2025年，2月5日实验结果说明：Hfr的DNA从一端开始，以线性方式逐段进入F－，这一端叫原点或O点。O点?azis?tons?lac＋?gal＋第43页，共74页，星期日，2025年，2月5日时间单位法以转移时间单位（每分钟）作为基因间距单位，可作出Hfr的“染色体”上的基因分布图（基因连锁图）。第44页，共74页，星期日，2025年，2月5日E.coli的连锁群E.coliK12的基因组环形图为100min第45页，共74页，星期日，2025年，2月5日假如让Hfr×F－杂交持续2h后中断杂交，发现一些F－?F＋。这说明Hfr的全部基因转移到F－内，排列到最后的F因子才进入F－，使F－?F＋。中断杂交实验与重组作图第46页，共74页，星期日，2025年，2月5日原点致育基因配对区致育基因F因子在细菌染色体上有很多插入位点，并且插入的取向不同一个F＋品系可以产生很多Hfr品系第47页，共74页，星期日，2025年，2月5日第48页，共74页，星期日，2025年，2月5日几个Hfr菌株的线性连锁群的产生HfrH菌株的基因转移顺序thrprolacpurga