细胞分离与破碎.pptVIP

01利用薄片形多孔性介质(如滤布)截留固液悬浮液中的固体粒子，进行固液分离的方法过滤是一种膜分离法021.3过滤滤液的透过阻力主要来自于：过滤介质和介质表面堆积的滤饼滤饼阻力是影响过滤速度的主要因素提高过滤速度方法：对滤液进行絮凝或凝聚预处理，改变料液性质在料液中加入助滤剂（如硅藻土）许多生物产物在细胞培养过程中不能分泌到胞外的培养液中，而保留在细胞内。破碎的细胞或其碎片利用上节所述的固液分离方法(主要是离心法)除去后，上清液用于进一步的分离纯化。这类生物产物需用上节所述方法收集菌体或细胞后，进行细胞破碎(celldisruption)，使目标产物选择性地释放到液相中。概述：2细胞破碎细胞壁动物、植物和微生物细胞结构差异革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌之间差异细菌与真菌间差异2.1细胞结构细胞膜细胞膜结构磷脂分子由疏水和亲水基团组成。疏水基团尾部有两烷基基团，亲水基团头部有两性基团，或者说是醇基，在内膜层中，磷脂的尾部聚集在一起，头部暴露在水中，形成磷脂双分子层。BIoseparatIonEngIneerIng第二章细胞分离与破碎本章节重点：离心沉降公式的推导及应用；离心设备的分类及工作原理；细胞破碎一般方法及原理。通过微生物发酵或动植物细胞培养得到的原料液，应首先将其中的菌体或细胞与培养液分离。如果目标产物为胞外物，可直接利用培养液进行以后的分离纯化操作；如果目标产物为胞内物，则要对菌体或细胞进行适当的处理，释放目标产物，然后除去细胞或其碎片，再进行目标产物的分离纯化。本章介绍细胞分离、目标产物释放以及蛋白质复性的主要方法和原理。概述01021细胞分离1重力沉降重力沉降在化工操作过程中常用的气-固、液-固和液-液分离手段，在生物分离过程中亦有较多的应用以液固沉降为例，重力沉降过程中固体颗粒受到重力、浮力和阻力的作用。阻力浮力重力1.滞留区：stokes方程10-4Re1沉降速度2.过渡区：Allen公式1Re103沉降速度3湍流区：Newton公式103Re2×105沉降速度一般而言单体细胞直径小、沉降速度很低，满足10-4Re1，可使用公式计算当颗粒浓度较大时，颗粒之间相互碰撞相干扰，影响沉降速度。此时，颗粒的沉降速度比单一颗粒小，需用空隙率函数f(ε):校正为悬浮液的空隙率01菌体和动植物细胞的重力沉降虽然简便易行，但菌体细胞体积很小，沉降速度很慢。02因此，实用上需使菌体细胞凝聚成较大颗粒后进行沉降操作，提高沉降速度。在中性盐的作用下，可使菌体表面双电层排斥电位降低，有利于菌体之间产生凝聚。另外，向含菌体的料液中加入聚丙烯酰胺或聚乙烯亚胺等高分子絮凝剂，可使菌体之间产生架桥作用而形成较大的凝聚颗粒。凝聚或絮凝不仅有利于重力沉降，而且还可以在过滤分离中大大提高过滤速度和质量。当培养液中含有蛋白质时．可使部分蛋白质凝聚而同时过滤除去。1.2离心沉降离心沉降是科学研究与生产实践中最广泛使用的非均相分离手段，不仅适用于菌体和细胞的回收或除去，而且可用于血球、胞内细胞器、病毒以及蛋白质的分离．也广泛应用于液---液相分离。单位质量的物质所受到的离心力为：其中N为转速，r为离心机半径离心设备的一个重要技术指标是：所能达到的离心力与重力的比值，称为分离因数。分离因数是衡量离心程度的参数r用z表示：1.2.1离心沉降速度注意：科技文献中常将离心操作的条件用多少g(如5000g、8000g等)表示．就是将离心力用Zg形式表达的。将stokes公式中的g用Zg代替，得到离心沉降速度vs公式：或者：需要注意的一个公式：室温下（20℃）某物质在水中的沉降系数：一些蛋白质的沉降系数表差速离心分级1.2.2离心分离法差速离心(Differentialcentrifugation)是生物化工最常用的离心分离方法。以菌体细胞的收集或除去为目的的固液离心分离是分级离心操作的一种特殊情况，即为一级分组分离。一些菌体细胞的大小和离心操作条件21区带离心是生化工程中的重要分离手段，根据离心操作条件不同，又分差速区带离心和平衡区带离心。两者的区别在于溶质的密度梯度中的与待分离物质的密度梯度不一样。两种区带离心法均事先在离心管中用某种低分子溶质(如蔗糖溶液）调配好密度梯废，在密度梯度之上加待处理的料液进行离心操作。3区带离心01区带离心法可用于蛋白质、核酸等生物大分子的分离纯化，但处理量小，