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Km是酶的特征性常数在酶的结构、溶液pH、温度等条件不变的情况下，酶促反应底物的Km不因反应中酶浓度的改变而不同。同一酶对其所催化的不同底物有不同的Km；不同酶对同一底物也有其各自的Km。Km的范围多在10-6～10-2mol/L之间。Km只与酶的性质有关,与酶的浓度无关B：反应速率对酶浓度作图，V与[E]呈直线关系。A：底物浓度曲线，其中，[E]1[E]2[E]3。从图中可知，[E]的变化不影响酶促反应的Km。一些酶的底物的Km6.0?10?3己-N-乙酰2葡萄糖胺溶菌酶2.5?10?2H2O2过氧化氢酶4.0?10?3D-乳糖?-半乳糖苷酶2.5?10?3N-苯甲酰酪氨酰胺1.08?10?1甘氨酰酪氨酰甘氨酸胰凝乳蛋白酶2.6?10?2HCO3?碳酸酐酶1.5?10?3D-果糖5?10?5D-葡萄糖4?10?4ATP己糖激酶（脑）Km（mol/L）底物酶Km在一定条件下可表示酶对底物的亲和力k1Km=k2+k3Km越大，表示酶对底物的亲和力越小；Km越小，表示酶对底物的亲和力越大。Km最小的底物大多数是此酶的天然底物如：己糖激酶对葡萄糖的Km1.5mmol/L对果糖的Km28mmol/L所以葡萄糖为最适底物一种酶对每一种底物都各有一个特定的Km多数酶可对一类化合物或一种化学键起催化作用，这种对底物分子不太严格的选择性称为相对特异性（relativespecificity）。脂肪酶不仅水解脂肪，也可水解简单的酯。胰蛋白酶水解由碱性氨基酸（精氨酸和赖氨酸）的羧基所形成的肽键。作用于大分子的酶的绝对和相对特异性的理解：例如核酸内切酶（二）多数酶具有相对特异性人体内有多种蛋白激酶，它们均催化底物蛋白质丝氨酸（或苏氨酸）残基上羟基的磷酸化蛋白激酶共有序列蛋白激酶A-X-R-(R/K)-X-(S/T)-X-蛋白激酶C-X-(R/K1-3,X0-2)-(S/T)-(X0-2,R/K1-3)-X蛋白激酶G-X-(R/K)2-3-X-(S/T)-X-Ca2+/钙调素蛋白激酶H-X-R-X-X-(S/T)-X-有些酶仅对底物分子的某种构型起催化作用1酶对空间构型所具有的特异性要求称为空间异构特异性（stereospecificity）2延胡索酸酶仅对延胡索酸(反丁烯二酸)起催化作用，将其加水生成苹果酸，对顺丁烯二酸则无作用3旋光异构特异性：例如：L-乳酸脱氢酶丙酮酸L-乳酸D-乳酸脱氢酶丙酮酸D-乳酸CCH3OHCOOHHCCH3OHCOOHHL(+)乳酸D(-)乳酸酵母中的酶D-型葡萄糖发酵酵母中的酶L-型葡萄糖发酵L-精氨酸酶L-精氨酸L-鸟氨酸+尿素D-精氨酸反丁烯二酸苹果酸延胡索酸酶延胡索酸酶顺丁烯二酸几何异构特异性酶促反应受多种因素的调控，以适应机体对不断变化的内外环境和生命活动的需要。如温度、pH、底物浓度、抑制剂、激活剂以及反应底物和产物对酶活性的调节；诱导剂或者阻遏剂对酶含量的调节等0201三、酶的可调节性四、酶活性测定原则酶活性或反应分析都需测定酶反应速率（一）酶反应速率通常用单位时间内底物减少量或产物增加量来表示酶的活性:以国际单位（internationalunit,IU）表示。在规定的实验条件下（如温度、pH的限定和足够的底物浓度等），每分钟催化1?mol底物转变成产物所需要的酶量为1个国际单位（IU）。催量（Katal）1IU＝16.67×10－9Kat1催量是指在特定条件下，每秒钟将1mol底物转化成产物所需的酶量比活性（specificactivity）：比较酶的纯度比活性单位是每mg蛋白质所含酶的国际单位数，其单位是IUmg?1。步骤：酶活力测定方法配制底物溶液

__保证底物的纯度和浓度(5Km)，及新鲜度确定反应条件

__温度：25℃、37℃、最适温度及其他