DB21T 3559-2021 软枣猕猴桃品种鉴别技术规程 SSR分子标记法.docxVIP

ICS65.020.01

CCSB60DB21辽宁省地方标准

DB21/T3559—2021

软枣猕猴桃品种鉴别技术规程SSR分子标记法

TechnicalregulationfortheidentificationofActinidiaargutaSSRmarkermethod

2021-12-30发布2022-01-30实施

辽宁省市场监督管理局发布

I

DB21/T3559—2021

目次

1范围 1

2规范性引用文件 1

3术语和定义 1

4测试准备 2

5DNA提取 2

6PCR扩增 3

7PCR扩增产物检测 3

8指纹比对 3

9数据记录 3

10结果判定 3

附录A（资料性）仪器设备与主要试剂、耗材 4

附录B（资料性）溶液配制 5

附录C（规范性）核心引物 6

附录D（规范性）软枣猕猴桃SSR等位基因数据记录格式 7

附录E（规范性）软枣猕猴桃SSR指纹图谱鉴别报告 8

II

DB21/T3559—2021

前言

本文件按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。

本文件由辽宁省林业和草原局提出并归口管理。

本文件起草单位：辽宁省经济林研究所。

本文件主要起草人：刘振盼、尤文忠、孙阳、周狄、李仁浩、李冬生、陈喜忠、张雪梅、卢立媛、徐开源、宋建宇、郝家臣、于雷。

本文件发布实施后，任何单位和个人如有问题和意见建议，均可以通过来电和来函等方式进行反馈，我们将及时答复并认真处理，根据实际情况依法进行评估及复审。

归口管理部门通讯地址：辽宁省林业和草原局（沈阳市和平区太原北街2号），联系电话：024

文件起草单位通讯地址：辽宁省经济林研究所（大连市甘井子区中华西路31号），联系电话：0411

1

DB21/T3559—2021

软枣猕猴桃品种鉴别技术规程SSR分子标记法

1范围

本文件规定了利用简单重复序列（Simplesequencerepeats，SSR）分子标记法对软枣猕猴桃（Actinidiaarguta(Sieb.Zucc)Planch.exMiq.）材料进行鉴别过程中样品准备、DNA提取、PCR扩增、PCR扩增产物检测、指纹比对、数据记录、结果判定等方面的技术要求。

本文件适用于SSR分子标记技术构建软枣猕猴桃资源DNA指纹图谱过程中DNA分子数据采集和鉴别。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T19557.1植物新品种特异性、一致性和稳定性测试指南总则LY/T2745仁用杏品种鉴定技术规程SSR分子标记法

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。3.1

PCR

指聚合酶链反应（polymerasechainreaction，PCR)，是利用一段DNA为模板，在DNA聚合酶和核苷酸底物共同参与下，将该段DNA扩增至足够数量，以便进行检测分析。

3.2

SSR分子标记SSRmolecularmarker

又称微卫星标记，由于每个简单重复序列两端的序列是高度保守的单拷贝序列，因而可根据两端的序列设计特异性引物，利用PCR技术对两条引物间的DNA重复序列进行扩增，通过电泳可以区分不同大小的扩增产物片段，经荧光染料标记加以区分。

3.3

待检样品testsample

待鉴别的软枣猕猴桃样品，由送检人提供。3.4

对照样品controlsample

2

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用于与待检样品进行指纹比对的样品，由送检人提供。3.5

核心引物coreprimer

扩增产物具有高度的稳定性和一致性（无干扰谱带），并具有较强的鉴别能力，可以用于建立软枣猕猴桃比对的人工合成引物。

3.6

SSR指纹图谱SSRfingerprint

采用SSR核心引物（或相当于核心引物）扩增出的待检样品和对照样品的DNA片段，通过毛细管电泳，得到不同大小的DNA片段图谱。

3.7

指纹对比fingerprintcompari