职业教育医学生物技术专业教学三下一代DNA测序技术二第一代.pptx

;;第三代基因测序技术;;PacBioSMRT测序技术;PacificBiosciences公司研发的单分子实时测序系统（SingleMoleculeRealTime，SMRT）应用了边合成边测序的原理，并以SMRT芯片为测序载体。技术创新：

零模波导孔（zero-modewaveguides,ZMWs）

荧光标记在核苷酸焦磷酸链上

高性能光学捕获系统PacBioRS;零模波导孔（zero-modewaveguides,ZMWs）

;荧光标记在核苷酸上的磷酸基团上;高性能光学捕获系统PacBioRS

;PacBioSMRT测序原理;纳米孔基因测序技术;纳米孔基因测序技术;;MinION的尺寸之小，只有一支笔的长度，重大约100克，MinION完全颠覆了测序仪的形象，MinION直接通过USB链接到笔记本上，原始的电流信号通过网络传到英国的服务器上，进行读取。一个MinION有500个纳米孔在并行测序，每个孔每秒测30bp，因此，要测到1G的数据，需要3天时间。;纳米孔;前提条件：（ⅰ)每个核苷酸都有其特有的电流阻塞信号;(ⅱ)纳米孔具有合适的几何尺寸,一次只容纳一个碱基通过;(ⅲ)电流分辨率足以检测核苷酸的移动;(ⅳ)核苷酸分子的运动必须是单向的;(ⅴ)纳米孔与薄膜之间的组合应当足够牢固以适应实验所需的温度和化学环境.;隧道电流对DNA分子经过电极时的位置、方向十分敏感,所以即使非常微小的差异也会引起隧道电流的变化,如何控制DNA分子准确、单一方向地通过纳米孔也很难。

电容检测法作为一种可能的电学解决方案,也有研究者对此进行了研究,当单个碱基通过纳米孔时,其自身所带电荷会引起纳米电容上的电荷量发生变化,从而可以检测到电压的变化,理论上4种不同的碱基所带电荷不同,引起的电压变压也会有所差异,因此可以用于DNA的测序.实际在测量单个碱基过程中得到的电压值会受到DNA骨架、附近碱基和溶液离子的影响,因此在碱基识别的准确度上还有很多需要研究的问题.;荧光测序

DNA序列信息转换成两种颜色的图形信息，然后再通过光学读出技术进行检测、分析。于是人们开发出了一种新的方法，使用合成DNA和光读取技术测序。待测DNA链中的每一个核苷酸都被替换成更长的由橙色和蓝色碱基组成的寡聚体，每一个待测核苷酸都被12bp的寡聚体替代。同时，通过这种信号转化还将DNA链中原本的四种信号A、T、G、C简化成了A、B两种信号。;缺陷;;