微生物限度检查课件.pptx

微生物限度检查;微生物限度检查法

系检查非规定灭菌制剂及其原料、辅料受到微生物污染程度的方法，检查项目包括细菌数、霉菌数、酵母菌数及控制菌检查。

;一、技术要求

1.检查应在环境洁净度10000级下的局部洁净度100级的单向流空气区域内进行。检验全过程必须严格遵守无菌操作，防止再污染。

2.单向流空气区域、工作台面及环境应定期按《医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法》的现行国家标准进行洁净度验证。

3.供试品检查时，如果使用了表面活性剂、中和剂或灭活剂，应证明其有效性及对微生物无毒性。

4.细菌培养温度为30～35℃；霉菌、酵母菌培养温度为23～28℃；控制菌培养温度为35～37℃。

5.检验结果以1g、1ml、10g、10ml或10cm2为单位报告，特殊品种可以最小包装单位报告。

;二、检验量

一次试验所用的供试品量(g、ml或cm2)。除另有规定外，一般供试品的检验量为10g或10ml；膜剂为100cm2；贵重药品、微量包装药品的检验量可以酌减。要求检查沙门菌的供试品，其检验量应增加20g或20ml。

检验时，应从2个以上最小包装单位中抽取供试品，膜剂还不得少于4片。一般应随机抽取不少于检验用量（两个以上最小包装单位）的3倍量供试品。

;三、样品供试液的制备;四、菌种

1.细菌、霉菌、酵母菌计数检查的对照试验菌种

大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、

白色念珠菌、黑曲霉

2.控制菌检查的对照菌种

大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、乙型副伤寒沙门菌、铜绿假单胞菌、生孢梭菌、白色念珠菌;五、培养基

1.细菌、霉菌及酵母菌计数检查常用的培养基

营养琼脂培养基、营养肉汤培养基、改良马丁培养基、

改良马丁琼脂培养基、玫瑰红钠琼脂培养基、

酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基。

2.控制菌检查常用的培养基

用于菌液制备的营养琼脂培养基等常规培养基

胆盐乳糖培养基、曙红亚甲蓝琼脂培养基等20余种用于培养基适用性检查、方法验证试验及供试品检查的培养基。;六、方法的验证试验;七、药品的微生物限度检验方法;1.计数方法的验证

用以保证方法中供试液没有抗菌活性、培养条件适宜细??、霉菌及酵母菌生长、制备过程中稀释剂未受微生物干扰、供试液稀释级选择适宜。

验证试验包括试验组、菌液组、供试品对照组及稀释剂对照组

判断指标:各试验菌每次试验的菌数回收率

;2.供试品检查方法

（1）平皿法

根据菌数报告规则取相应稀释级的供试液1ml，置直径90mm的无菌平皿中，注入15～20ml温度不超过45℃的溶化的营养琼脂培养基（细菌）或玫瑰红钠琼脂培养基（霉菌）或酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基（酵母菌），混匀，凝固，倒置培养。每稀释级每种培养基至少制备2个平板。平皿法以培养后细菌、霉菌或酵母菌在琼脂平板上形成的独立可见的菌落为计数依据，按照菌数报告规则进行报告。

同时取试验用的稀释液1ml，同法操作，作为阴性对照试验。每种计数用的培养基各制备2个平板，均不得有菌生长。;2.供试品检查方法

（2）薄膜过滤法

所用滤膜孔径不大于0.45μm，直径一般为50mm。

取相当于每张滤膜含1g、1ml或10cm2供试品的供试液（或适宜稀释级的供试液1ml），加至适量的稀释剂中，混匀，过滤。用pH7.0无菌冲洗液冲洗滤膜后，取出滤膜，菌面朝上贴于营养琼脂培养基或玫瑰红钠琼脂培养基或酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基平板上培养，培养条件和计数方法同平皿法。每种培养基至少制备一张滤膜。根据菌数报告规定计数，如超过规定限量即可认定不合格。

同时取试验用的稀释液1ml同法操作，作为阴性对照，阴性对照不得有菌生长。;（二）控制菌检查

检查非规定灭菌制剂中是否存在有可疑的致病菌

控制菌检查项目包括大肠埃希菌、大肠菌群、沙门菌、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、梭菌及白色念珠菌。;（二）控制菌检查

1.适用性检查

适用性检查项目包括促生长能力、抑制能力及指示能力的检查

促生长能力检查用以保证在相应控制菌检查规定的培养温度及最短培养时间内，试验菌生长良好（液体培养基）、菌落大小、形态特征与对照菌一致（固体培养基）

抑制能力检查用以保证其他试验菌无法生长

指示能力检查用以保证培养基上试验菌的生长情况（液体培养基）、菌落大小、形态特征（固体培养基）、指示剂反应情况等与对照培养基一致;（二）控制菌检查

2.方法验证试验

控制菌检查方法的验证试验

用以保证方法中供试液没有抗菌活性、所采用方法适合于该产品的控制菌检查;（二）控制菌检查

3.阳性对照试验和阴性对照试验

试验菌的阳性对照试验：应检出相应的控制菌

稀释液的阴性对照试验：应无菌生长;（二）控制菌检查

4.控制菌检查法

（1）大肠埃希菌

检查法：取供试