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细菌多糖药物鉴别多糖单糖水解如右旋糖酐在碱性条件下水解,生成葡萄糖,可通过葡萄糖的相关反应进行鉴别:葡萄糖与铜离子(Cu2+)反应,将其还原为红色的氧化亚铜,即可观察水解后的溶液与硫酸亚铜试液加热反应后生成的红棕色沉淀来进行判别。
细菌多糖药物检查1.氮含量右旋糖酐是以蔗糖为底物,经微生物发酵而生产的高分子葡聚糖,在发酵滤液中可能存在微量的来自发酵细胞的蛋白质,这些蛋白质在用乙醇反复沉淀提纯的过程中凝固变性,形成沉淀而混入右旋糖酐成品中,因此需要对杂蛋白的量进行控制。各国药典采用检查氮含量来控制右旋糖酐中的杂蛋白含量。
细菌多糖药物检查2.分子量与分子量分布微生物发酵生产的葡聚糖分子量很大,需要水解后才能得到具有不同分子量大小的右旋糖酐产品。在水解过程中,如果水解不完全,则会引入一些大分子量的右旋糖酐,因此需要对右旋糖酐产品的分子量与分子量分布进行控制。
细菌多糖药物含量测定右旋糖酐的含量测定为旋光光度法,是根据右旋糖酐水溶液的旋光度在一定范围内与其浓度呈正比的原理来测定右旋糖酐含量,具体测定法收载于《中国药典》(2020年版)通则。在《中国药典》(2020年版)中对右旋糖酐20葡萄糖注射液的含量测定包含两项。
细菌多糖药物含量测定1.旋光度测定法测定右旋糖酐含量取待测品10ml,用水稀释至25ml(6%规格)或50ml(10%规格),摇匀后照《中国药典》(2020年版)通则收载的旋光度测定法进行测定,并计算右旋糖酐的含量。
细菌多糖药物含量测定2.碘量法测定水解后生成的葡萄糖含量精密量取待测品2ml至碘量瓶中,精密加0.05mol/L的碘滴定液25ml,边振摇边滴加0.1mol/L的NaOH滴定液50ml,暗处放置30min后,加稀HSO、5ml,用0.1mol/L硫代硫酸钠滴定液滴定,近终点时加淀粉指示剂2ml,继续滴定至蓝色消失,并将滴定结果用0.12g(6%规格)或0.20g(10%规格)的右旋糖酐20做空白试验校正。
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