血红蛋白的提取和分离试用.pptVIP

第1层（最上层）：甲苯层（无色透明）01第2层（中上层）：脂溶性物质沉淀层（白色薄层固体）02第3层（中下层）：血红蛋白的水溶液层（红色透明液体）03第4层（最下层）：杂质沉淀层（暗红色）04②试管中溶液层次用滤纸过滤，除去脂溶性沉淀层，于分液漏斗中静置片刻后，分出下层的红色透明液体分离透析取1ml的血红蛋白溶液装入透析袋中，将透析袋放入盛有300ml的物质的量浓度为20mmol/l的磷酸缓冲液中（pH为7.0），透析12小时过程除去样品中分子量较小的杂质透析目的123利用透析袋透析2、凝胶色谱打孔挖出凹穴安装移液管头部覆盖尼龙网，再用100目尼龙纱包好，插到玻璃管的一端①取长40厘米，内径1.6厘米的玻璃管，两端需用砂纸磨平（1）凝胶色谱柱的制作②底塞的制作：底塞中插入的玻璃管的上部不得超出橡皮塞的凹穴底面，否则难以铺实尼龙网，还会导致液体残留，蛋白质分离不彻底注意事项：⑤安装其他附属结构③顶塞的制作打孔安装玻璃管④组装将上述三者按相应位置组装成一个整体0102A、材料凝胶的选择交联葡聚糖凝胶（G-75）B、代表意义：“G”表示凝胶的交联程度，膨胀程度及分离范围75表示凝胶的得水值，即每克凝胶膨胀时吸水7.5克（2）凝胶色谱柱的装填配置凝胶悬浮液：计算并称取一定量的凝胶浸泡于蒸馏水或洗脱液中充分溶胀后，配成凝胶悬浮液01凝胶色谱柱的装填方法02固定03装填04将色谱柱处置固定在支架上05将凝胶悬浮液一次性的装填入色谱柱内，装填时轻轻敲动色谱柱，使凝胶填装均匀06②凝胶的前处理注意：01凝胶装填时尽量紧密，以降低凝胶颗粒之间的空隙02装填凝胶柱时不得气泡存在：因为气泡会搅乱洗脱液中蛋白质的洗脱次序，降低分离效果03④洗涤平衡1、液面不要低于凝胶表面，否则可能有气泡混入，影响液体在柱内的流动与最终生物大分子物质的分离效果注意：2、不能发生洗脱液流干，露出凝胶颗粒的现象装填完毕后，立即用缓冲液洗脱瓶，在50cm高的操作压下，用300ml的20mmol/l的磷酸缓冲液（pH为7.0）充分洗涤平衡12小时2003年4月14日宣布人类基因组序列图完成这标志着进入了后基因组和蛋白质组时代人类基因组：指DNA分子所携带的全部遗传信息蛋白质组：生物个体表达的蛋白质分子的总和。主要是对蛋白质功能的研究一、基础知识(一）蛋白质占细胞干重的50％以上，细胞中含量最多的有机物2、组成元素C、H、O、N1、含量3、相对分子质量高分子化合物4、基本组成单位氨基酸5、氨基酸通式RHCCOOHNH26、氨基酸连接方式脱水缩合8、分子结构7、肽键CONH氨基酸肽链蛋白质脱水缩合盘曲折叠（一条或者多条）蛋白质结构的多样性生理功能细胞和生物体的结构物质，是人体发育和组织更新的主要原料，具有运输、调节、免疫、催化等作用，是一切生命活动的主要承担者氨基酸的种类不同；数目成百上千；排列顺序变化多端；多肽链的空间结构千差万别蛋白质的提取分离生物大分子的基本思路选用一定的物理或化学的方法分离具有不同物理或化学性质的生物大分子蛋白质分离和提取的原理根据蛋白质各种特性的差异，如分子的形状和大小、所带电荷的性质和多少、溶解度和吸附的性质和对其他分子的亲和力等等，可以用来分离不同蛋白质凝胶凝胶色谱法（别名分配色谱法）概念：根据被分离物质的蛋白质相对分子质量的大小，利用具有网状结构的凝胶的分子筛作用，来进行分离实例：葡聚糖、琼脂糖性质：一些微小多孔的球体，内含许多贯穿的通道（三）分离蛋白质的方法STEP1STEP2STEP3STEP4大多数凝胶是由多糖类化合物（如葡聚糖或琼脂糖）构成的多孔小球体，内部有许多贯穿的通道凝胶色谱法的原理—分子筛效应分子量较大的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在凝胶外部移动，路程较短，移动速度较快。相对分子质量不同的蛋白质分子因此得以分离当不同的蛋白质通过凝胶时，分子量较小的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程较长，移动速度较慢1具体过程2蛋白质分子量的大小（4）依据的特性概念01在一定的范围内，能对抗外来少量强酸、强碱或稍加稀释不引起溶液PH发生明显变化的作用叫做缓冲作用，具有缓冲作用的溶液叫做缓冲溶液02能够抵制外界的酸或碱的对溶液的PH值的影响，维持PH基本不变03作用04（四）缓冲溶液4、缓冲溶液的组分分类①弱酸和弱酸盐组合H2CO3NaHCO3CH3COOH