LncRNA+606938抑制结直肠癌细胞增殖的分子机制研究.pdf

摘要

据报道，结直肠癌（colorectalcancer，CRC）在我国发病率与死亡率均位于各种

癌症流行统计的前列，对我国居民的健康造成了严重的影响。因此，寻找新的治疗结

直肠癌的靶点，作为结直肠癌的肿瘤标记物用于早期诊断和预后判断，对提高结直肠

癌的临床治疗有着重要的意义。

近年来，关于非编码RNA在疾病治疗中的应用研究被广泛关注。长链非编码

RNA（longnon-codingRNA，lncRNA）被证实在肿瘤治疗中起到至关重要的作用。

本课题组前期通过转录组学分析发现了在结直肠癌中可以作为靶点的新lncRNA

606938，然而关于其在结直肠癌中的作用和分子机制尚不清楚。因此本课题以

lncRNA606938作为研究对象，探讨了lncRNA606938对结直肠癌生物学功能的影

响，并阐述其抑制结直肠癌细胞发生发展的分子机制。主要的研究内容和研究结果如

下：

1.lncRNA606938对结直肠癌生物学功能影响的研究

（1）RT-qPCR实验结果表明，相较于正常的结直肠粘膜细胞FHC，lncRNA

606938在多种结直肠癌细胞株中是低表达的。

（2）平板克隆实验结果表明，过表达lncRNA606938可以抑制DLD-1与SW620

的克隆形成能力，敲除lncRNA606938之后此现象被逆转。

（3）流式细胞术结果表明，过表达lncRNA606938可以使DLD-1与SW620的

细胞周期阻滞在G1期，从而抑制细胞增殖活性，并促进DLD-1与SW620的凋亡。

（4）Westernblot实验结果表明，过表达lncRNA606938可以下调DLD-1与

SW620中G1期细胞周期蛋白质的表达，并上调促凋亡蛋白质表达。

2.lncRNA606938与TRIM33相互作用研究

（1）通过RNApulldown、质谱检测并结合文献调研，筛选出与结直肠癌关系密

切的蛋白质TRIM33作为研究靶点。

（2）catFAPID预测结果表明lncRNA606938的1266-1399区域与TRIM33的

826-877区域的结合可能性最大。

（3）RNApulldown与RIP实验进一步证实了TRIM33与lncRNA606938在

DLD-1与SW620中存在相互作用。

（4）Westernblot实验结果表明，过表达lncRNA606938可以上调DLD-1与

I

SW620中TRIM33的表达，两者之间呈正相关关系。

3.lncRNA606938通过TRIM33/β-catenin/c-Myc信号轴调控结直肠癌细胞增殖的

机制研究

（1）Westernblot实验结果表明，过表达lncRNA606938可以抑制DLD-1与

SW620中β-catenin与c-Myc的表达。敲低组结果与之相反。

（2）蛋白质半衰期（CHX）实验结果表明，过表达lncRNA606938可以缩短

DLD-1与SW620中β-catenin的半衰期的时长，加速其降解。

（3）TRIM33干扰实验结果表明，敲低TRIM33表达后，DLD-1与SW620中β-

catenin与c-Myc的表达升高。

（4）Rescue实验结果表明，lncRNA606938通过TRIM33抑制β-catenin与c-

Myc的表达，敲低TRIM33后结果被逆转。

综上所述，lncRNA606938可以通过TRIM33抑制Wnt信号通路中β-catenin/c-

Myc的表达，在体外调控结直肠癌细胞的增殖与凋亡。具体为，lncRNA606938可以

与TRIM33靶向结合并调控TRIM33的表达，TRIM33通过促进β-catenin的降解抑

制β-catenin及下游的原癌基因c-Myc、CyclineD1的表达，最终抑制结直肠癌的进

程。本研究为结直肠癌的临床治