酶学与酶工程.ppt

退出第1页，共38页，星期日，2025年，2月5日第一章酶学与酶工程第六节影响酶活力的因素第七节酶的分离纯化第2页，共38页，星期日，2025年，2月5日第六节影响酶活力的因素一、酶活力的测定酶活力（enzymeactivity）也称为酶活性，是指酶催化一定化学反应的能力。1.酶活力与酶反应速度酶活力的大小可以用一定条件下所催化的某一化学反应的反应速度（reactionvelocity）来表示，两者呈线性关系。酶反应速度可用单位时间内底物的减少量或产物的增加量来表示。第3页，共38页，星期日，2025年，2月5日Time第4页，共38页，星期日，2025年，2月5日2.酶的活力单位（U，activityunit）酶活力的大小及酶含量的多少，用酶活力单位表示，即酶单位（U）。酶单位的定义是：在一定条件下，一定时间内将一定量的底物转化为产物所需要的酶量。这样酶的含量就可以用每克酶制剂或每毫升酶制剂含有多少酶单位来表示（U/g或U/ml）。1961年国际酶学委员会规定“国际单位”表示酶活力；一个国际单位（IU）是指在最适反应条件下，1每分钟催化1μmoL底物转化为产物所需要的酶量。1972年又推荐一种新的酶活力单位——Katal（简称Kat）单位。一个katal单位是指在最适反应条件下，1每秒钟催化1moL底物转化为产物所需要的酶量。1Kat＝6?107IU，1IU=16.7nKat第5页，共38页，星期日，2025年，2月5日3.酶的比活力（specificactivity）酶的比活力代表酶的纯度，国际酶学委员会规定比活力用每mg蛋白质所含有的酶活力单位数表示。对同一种酶比活力愈大，纯度愈高。4.酶的转换数：Kcat值Kcat值以一定条件下每秒钟每个酶分子转换底物的分子数来表示酶的催化效率。5.酶活力的测定方法（1）分光光度法（spectrophotometry）（2）荧光法（fluorometry）（3）同位素测定方法（4）电化学方法（electrochemicalmethod）第6页，共38页，星期日，2025年，2月5日二、影响酶活力的因素1.底物浓度随着酶反应的进行，底物浓度逐渐下降，产物逐渐积累，酶反应速度也会逐渐变小。为了排除底物和产物浓度变化对酶反应速度的影响，人们采用酶反应的初速度作为衡量的指标。第7页，共38页，星期日，2025年，2月5日2、酶浓度在底物浓度饱和的情况下，酶浓度的加倍将导致V0的加倍，即V0与酶浓度的关系图为直线图形。3、温度温度对酶反应速率的影响表现在两个方面，一方面是当温度升高时，与一般化学反应一样，反应速率加快。反应温度提高10℃，其反应速率与原来反应速率之比称为反应的温度系数，用Q10表示，对大多数酶来讲温度系数Q10多为2，也就是说，即温度每升高10℃，酶反应速率为原反应速率的2倍。另一方面由于酶是蛋白质，随着温度升高，使酶蛋白逐渐变性而失活，引起酶反应速率下降。第8页，共38页，星期日，2025年，2月5日在较低的温度范围内，酶反应速率随温度升高而增大，但超过一定温度后，反应速率反而下降，因此只有在某一温度下，反应速率达到最大值，这个温度就称为酶反应的最适温度（opptimumtemperature)。每种酶在一定条件下都有其最适温度。vt/0C最适温度第9页，共38页，星期日，2025年，2月5日4、pH酶的活力受环境pＨ的影响，在一定pＨ下，酶表现最大活力，高于或低于此pＨ，酶活力降低，通常把表现出酶最大活力的pＨ称为该酶的最适pＨ（optimumpH)各种酶在一定条件下都有其最特定的最适pH，因此最适pH是酶的特性之一。但酶的最适pH不是一个常数，受许多因素影响，随底物种类和浓度、缓冲液种类和浓度的不同而改变，因此最适pH只有在一定条件下才有意义。第10页，共38页，星期日，2025年，2月5日第11页，共38页，星期日，2025年，2月5日pH影响酶活力的原因可能有以下几个方面：（1）过酸或过碱可以使酶的空间结构破坏，引起酶构象的改变，酶活性丧失。（2）当pH改变不很剧烈时，酶虽未变性，但活力受到影响。（3）pH影响维持酶分子空间结构的有关基团解离，从而影响了酶活性部位的构象，进而影响酶的活性。第12页，共38页，星期日，2025年，2月5日5、激活剂对酶反应