生物化学实验课件课件课件.ppt

2、向以上各试管加酪蛋白的NaAc溶液1mL(加一管，摇匀一管)。此时1，2，3，4管的pH依次为5.9，5.3，4.7，3.5。观察其混浊度。静置10分钟后，再观察其混浊度(最混浊的一管的pH即为酪蛋白的等电点)。第87页，共127页，星期日，2025年，2月5日(二)蛋白质的沉淀及变性1、蛋白质的盐析：无机盐(硫酸铵、硫酸钠、氯化钠等)的浓溶液能析出蛋白质。盐的浓度不同，析出的蛋白质也不同。(如球蛋白可在半饱和硫酸铵溶液中析出，而清蛋白则在饱和硫酸铵溶液中才能析出)蛋白质溶液5mL于试管中加5mL饱和硫酸铵混均静置数分钟倒出少量沉淀加少量水观察是否溶解(？)第88页，共127页，星期日，2025年，2月5日2、重金属离子沉淀蛋白质(重金属离子与蛋白质结合成不溶于水的复合物)取蛋白质溶液2mL于试管中加3%硝酸银溶液1-2滴振荡放置片刻倾去上清液向沉淀中加入少量水观察是否溶解(？)第89页，共127页，星期日，2025年，2月5日物质被分离后在纸层析图谱上的位置是用Rf值（比移值）来表示的：原点到层析点中心的距离Rf＝原点到溶剂前沿的距离在一定的条件下某种物质的Rf值是常数，Rf值的大小与物质的结构、性质、溶剂系统、层析滤纸的质量、展层方式、层析温度和pH等因素有关。本实验利用纸层析法分离氨基酸。第55页，共127页，星期日，2025年，2月5日三、器材及试剂1、器材：层析缸（或标本缸），毛细管，喷雾器，电吹风，培养皿，层析滤纸(质地必须均一、平整及厚薄均匀，要有一定的强度。新华1号或3号滤纸(或Whatman1号或3号滤纸)2、试剂：0.5%的赖氨酸，0.5%的脯氨酸，0.5%的缬氨酸，0.5%的苯丙氨酸，0.5%的混合氨基.酸，显色剂，扩展剂第56页，共127页，星期日，2025年，2月5日四、实验步骤1．取扩展剂约5ml置于小烧杯中做平衡溶剂，然后将小烧杯置于密闭的层析缸中（或标本缸）。2．取层析滤纸（长22cm，宽14cm）一张。在纸的一端距边缘2-3cm处用铅笔划一条直线，在此直线上每间隔2cm作一个记号(“×”型而不是“.”型)，共作5个记号作为点样点；另外，沿展层方向在滤纸两边距边缘约0.5-1cm处对称地划两条直线，分别将其四等分，各取其三个等分点作为缝线点。第57页，共127页，星期日，2025年，2月5日3、点样用毛细管将各种氨基酸样品分别点在这6个点样点位置上(注意速度要快，否则易扩散开)，干后再点一次。每点在纸上扩散的直径最大不超过3mm。4．扩展用线将滤纸缝成筒状，纸的两边不能接触，将盛有约20ml扩展剂的培养皿迅速置于密闭的层析缸中，并将滤纸直立于培养皿中（点样的一端在下，扩展剂的液面需要低于点样纸1cm）。待溶剂上升15-20cm时取出滤纸，用铅笔描出溶剂前沿界线，自然干燥或者用吹风机吹干。第58页，共127页，星期日，2025年，2月5日5．显色用喷雾器均匀喷上0.1%茚三酮正丁醇溶液，然后置烘箱中烘烤5分钟（100℃）或用热风吹干即可以显出个层析斑点。6．计算各种氨基酸的Rf值五、实验结果记录第59页，共127页，星期日，2025年，2月5日六、思考题：1．何谓纸层析法？2．何谓Rf值？影响Rf值的主要因素是什么？3．怎样制备扩展剂？预习：实验四蛋白质及氨基酸的呈色反应。P125第60页，共127页，星期日，2025年，2月5日实验四蛋白质及氨基酸的呈色反应第61页，共127页，星期日，2025年，2月5日一、实验目的1、了解构成蛋白质的基本结构单位及主要连接方式。2、了解蛋白质和某些氨基酸的呈色反应原理。3．学习几种常用的鉴定蛋白质和氨基酸的方法第62页，共127页，星期日，2025年，2月5日二、实验原理（一）双缩脲反应双缩脲反应:尿素加热至180℃左右，生成双缩脲并放出一分子氨。双缩脲在碱性环境中能与Cu2+结合生成紫红色化合物。蛋白质分子中有肽键，其结构与双缩脲相似，能发生双缩脲反应。这可用于蛋白质的定性或定量测定。第63页，共127页，星期日，2025年，2月5日第64页，共127页，星期日，2025年，2月5日第65页，共127页，星期日，2025年，2月5日注意:①双缩脲反应不仅为含有两个以上肽键的物质所特有，许多含有一个肽键和一个氨基的物质也能发生此反应如–CS-NH2，-CH2-N