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医学硕士研究生开题报告范文

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一、立题依据(科学意义及国内外现状分析及参考文献)

恶性黑色素瘤是一种高度恶性且最具侵袭性的癌之一，

多发生于皮肤，早期发生血行转移。对放、化疗不敏感，在

世界范围内发病率增高，人们一直在期待着可以征服恶性黑

素瘤的新的疗法的出现!

最近大量的数据表明恶性肿瘤的发展与T-钙粘蛋白的

表达变化相关.T-钙粘蛋白已在乳腺癌、前列腺癌、肝癌、

肺癌[1-3]、胃癌、胰腺癌、卵巢癌[4-9]等多种恶性肿瘤

中被检测到表达减少.最近的研究表明T/H—钙粘蛋白在乳

腺癌中的重新表达能抑制肿瘤细胞的生长,降低体外培养的

肿瘤细胞的侵袭潜能[1].T/H—钙粘蛋白这个新型钙粘蛋白

分子在人类许多癌细胞中表达都降低表明它或许在肿瘤细

胞的侵袭和转移[10]及维持正常细胞的表型中起重要作用

[11].

T/H—钙粘蛋白与肿瘤的发生、发展有着密切的联系,也

许它会为肿瘤的诊断和治疗带来新的契机.

T-钙粘蛋白是否对恶性黑色素瘤也有作用，目前还没有

相关研究的报道，所以本实验将进行相关方面的探讨性研究!

二、研究内容及预期成果(说明具体研究内容、创新点

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及拟解决的关键问题、预期成果及提供形式)

研究内容：

第一部分：正常表皮组织、痣细胞及黑色素瘤细胞中

T-cadherin表达情况

第二部分T-cadherin基因克隆和真核表达载体的构建

第三部分：T-cadherin基因的真核表达及生物活性分析

创新点：首次将T-cadherin基因转染黑素瘤细胞

拟解决的关键问题：通过RT-PCR反应扩增出T-cadherin

的基因全长。

预期成果及提供形式：

观察T-钙粘蛋白在正常皮肤组织细胞、痣细胞及黑色素

瘤细胞中的表达情况!

进一步阐明T-钙粘蛋白作用机制

T-钙粘蛋白基因转染入黑色素瘤细胞后观察对其增殖

和转移活性的抑制情况，探索临床诊断和治疗黑色素瘤及其

它肿瘤的方法!

三、研究方案(包括研究方法、技术路线、研究进度安

排)

研究方法：

第一部分：正常表皮组织、痣细胞及黑色素瘤细胞中

T-cadherin表达情况

免疫组织化学和免疫细胞化学

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1.材料：从正常人皮肤切取的痣组织，人黑色素瘤细胞

株

2.主要试剂和溶液

(1)第一抗体：兔抗人T-cadherin抗体

(2)第二抗体：生物素标记羊抗兔IgG

(3)“三抗”：链亲和霉素标记HRP

3.设备

4.方法

(1)冷冻切片的免疫染色程序

(2)活细胞的免疫染色程序

5.荧光显微镜检

注意：为保证结果的可靠性应该同时设有对照

阳性对照(正常组织);

阴性对照(PBS代替一抗)以证明抗体的特异性。

第二部分T-cadherin基因克隆和真核表达载体的构建