一种mRNA活性细胞的改进式载体注射方法_转自TXT.docx

[发明公布]一种mRNA活性细胞的改进式载体注射方法

申请号：2022107855876

发明人：杜希静

申请人：湖南基茵美生命科技有限公司

摘要：

本发明涉及生物工程技术领域，并公开了一种mRNA活性细胞的改进式载体注射方法，包括如下步骤，载细胞生长因子和多肽脂质体的制备；取冻存的插入有胶原蛋白基因编码的mRNA，4000r/min离心1min，加入DEPC水震荡摇晃使其溶解；取含有25ug的mRNA溶液加入等质量的透明质酸溶液混合，室温静置10min，再与鱼精蛋白以体积比1:1进行混合，静置10min；制取载mRNA与细胞生长因子以及多肽脂质体纳米粒并进行皮下注射，本发明通过制备载mRNA与细胞生长因子以及多肽脂质体纳米粒进行皮下注射，为人体合成胶原蛋白提供原料的同时还具有生长因子的促进过程，胶脂质体作为mRNA载体保证了插入mRNA上的基因序列得以高效进行胶原蛋白的转录过程。

权利要求书：

1.一种mRNA活性细胞的改进式载体注射方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤S1，载细胞生长因子和多肽脂质体的制备；

步骤S2，取冻存的插入有胶原蛋白基因编码的mRNA，4000r/min离心1min，加入DEPC水震荡摇晃使其溶解；

步骤S3，取含有25ug的mRNA溶液加入等质量的透明质酸溶液混合，室温静置10min，再与鱼精蛋白以体积比1:1进行混合，静置10min，备用；

步骤S4，在步骤S3的混合液中加入50uL的载细胞生长因子和多肽脂质体，室温静置10min，加入50uLDSPE?PEG2000，在50℃水浴锅中静置10min，得制备好的载mRNA与细胞生长因子以及多肽脂质体纳米粒；

步骤S5，将步骤S4的脂质体纳米粒通过皮下注射的方式进行给药。

2.根据权利要求1所述的一种mRNA活性细胞的改进式载体注射方法，其特征在于，所述步骤S1的制备步骤具体如下：采用薄膜分散法，称取质量比为3:1的阳离子脂质体DOTAP与胆固醇，加入圆底晒平中并加入适量的三氯甲烷，30℃旋蒸至瓶底形成一层脂质体薄膜，真空干燥2h出去有机溶剂，加入10ml去离子水，超声波处理30min，按照细胞生长因子、多肽分子以及脂质体质量比1:1:5，加入足量的细胞生长因子和多肽分子，超声处理70min，得到载细胞生长因子和多肽脂质体备用。

3.根据权利要求1所述的一种mRNA活性细胞的改进式载体注射方法，其特征在于，所述步骤S2的胶原蛋白基因编码包括COL1A1、COL1A2、COL2A1、COL3A1、COL5A1、COL5A2、COL5A3、COL11A1、COL11A2、COL11A3、COL24A1。

4.根据权利要求1所述的一种mRNA活性细胞的改进式载体注射方法，其特征在于，所述步骤S1的多肽分子量为180?1000。

5.根据权利要求1所述的一种mRNA活性细胞的改进式载体注射方法，其特征在于，所述步骤S1的细胞生长因子为白细胞介素2。

6.根据权利要求1所述的一种mRNA活性细胞的改进式载体注射方法，其特征在于，所述步骤S2DEPC水的制备过程如下：

取去离子水1000ml，精确加入DEPC1ml，保鲜膜密封瓶口，磁力搅拌过夜，配置成0.1％DEPC水。

7.根据权利要求1所述的一种mRNA活性细胞的改进式载体注射方法，其特征在于，所述步骤S3鱼精蛋白溶液配置过程如下：

取鱼精蛋白2mg，放入10ml容量瓶加入0.1％DEPC水溶解定容。

8.根据权利要求1所述的一种mRNA活性细胞的改进式载体注射方法，其特征在于，所述步骤S4DSPE?PEG2000配置过程如下：

取二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺－聚乙二醇200050mg，放入5ml容量瓶，加入0.1％DEPC水溶液定容。

9.根据权利要求1所述的一种mRNA活性细胞的改进式载体注射方法，其特征在于，所述步骤S5给药分3?5次进药，且每次给药不超过总药量的五分之一。

技术领域

[0001]本发明涉及生物工程技术领域，更具体地说，涉及一种mRNA活性细胞的改进式载体注射方法。

背景技术

[0002]胶原蛋白是动物体内含量最多的结构蛋白，具有很强的生物活性及生物功能，为细胞生长提供依附和支撑，能诱导上皮细胞、纤维细胞等进行黏附、增殖和迁移，使结缔组织具有机械强度；同时，具有止血、生物相容性和生物降解性；还能改善细胞生长微环境，促进皮肤组织新陈代谢，修复皮肤屏障，能够引导机体组织再生。基于这些特征，胶原蛋白在烧伤、创伤、眼角膜疾病、保健、美容、矫形、硬组织修复、创面止血、药物传递、缓释技术等医药卫生领域有着广泛应用。

[0003]皮肤的暗沉，斑片，毛孔扩大，毛孔塌陷，干燥缺水，甚至还有痘印，暗黄，法令纹，敏感肌等等，