饲料中粗蛋白的测定.pptVIP

**4.3饲料中粗蛋白的测定*蛋白质是畜禽日粮中最主要的物质之一，蛋白质是生命的物质基础。测定饲料中蛋白质的含量，对于初步评价饲料的营养价值、合理开发利用饲料蛋白资源、提高产品质量、优化饲料配方、指导经济核算及生产过程控制均具有极重要的意义。饲料中蛋白质的检测十分重要！直接法一、蛋白质的测定方法*根据蛋白质的物理、化学性质直接测定蛋白质含量。01双缩脲法02Folin—酚试剂法（Lowry法）03紫外吸收法（最常见的280nm）04考马斯亮兰法（Bradford法）－染料结合法05一、蛋白质的测定方法*2．间接法通过测定样品中总含氮量推算蛋白质含量（根据：每种蛋白质的含氮量是恒定的，N×6.25）。凯氏定氮法（Kjeldahl）8~9小时杜马斯燃烧定氮法（DumasCombustionMethod）—900℃~1200℃高温燃烧，燃烧过程中产生混合气体，其中的干扰成分被一系列适当的吸收剂所吸收，混合气体中的氮氧化物被全部还原成分子氮，随后氮的含量被热导检测器检测。3～5分钟强碱直接蒸馏法—样品在强碱溶液中消煮，使蛋白质中的不稳定氮素以氨的形式释放出来，在一定条件下，所释放的氨和样品中的含氮量成正比且有很好的相关性，建立不稳定氮量与全氮量之间的回归方程。～20分钟纳氏试剂比色法二、凯氏定氮法测定粗蛋白含量*19世纪（1883）建立的经典方法，结果可靠（最常用的标准方法），凯氏定氮法由于具有测定总有机氮量准确度高，可测定各种不同形态样品等两大优点，因而被公认为是测定食品、饲料、种子、生物制品、药品中蛋白质含量的标准分析方法。但操作费时（8～9h）——改良方法：加催化剂加快分析速度、仪器改进（自动、半自动凯氏定氮仪）。12二、凯氏定氮法测定粗蛋白含量*原理各种饲料的有机物质在还原性催化剂（如CuSO4，K2SO4或Na2SO4或Se粉）的帮助下，用浓硫酸进行消化作用，使蛋白质和其它有机态氮（如氨基酸、酰胺、核酸，在一定处理下也包括硝酸态氨）都转变成NH4+并与H2SO4化合成（NH4）2SO4，而非含氮物质，则以CO2↑，H2O↑，SO2↑状态逸出。然后加碱蒸馏，使氨蒸出，用硼酸吸收后再以标准盐酸或硫酸溶液滴定。根据标准酸消耗量可计算出蛋白质的含量。二、凯氏定氮法测定粗蛋白含量*1.原理：使有机物脱水后被炭化为碳、氢、氮；：将有机物炭化后的碳化为二氧化碳，硫酸则被还原成二氧化硫；2H2SO4＋C＝2SO2＋2H2O＋CO2二氧化硫使氮还原为氨，本身则被氧化为三氧化硫，氨随之与硫酸作用生成硫酸铵留在酸性溶液中。H2SO4＋2NH3＝(NH4)2SO42NH2(CH)2COOH＋13H2SO4＝(NH4)2SO4＋6CO2＋12SO2＋16H2O①样品消化浓硫酸具有脱水性浓硫酸具有氧化性二、凯氏定氮法测定粗蛋白含量*01040203原理消化液在浓碱的作用下进行蒸馏，释放出的氨态氮，用硼酸溶液吸收之并与之结合成为四硼酸铵。蒸馏2NaOH＋(NH4)2SO4＝2NH3↓＋Na2SO4＋2H2O2NH3+4H3BO3=(NH4)2B4O7+5H2O二、凯氏定氮法测定粗蛋白含量*1.原理以甲基红－溴甲酚绿作指示剂，用HCl标准溶液（0.1mol/L）滴定，根据标准酸的消耗量，即可计算有机氮的含量。而后，根据不同的饲料再乘以一定的系数（通常用6.25系数计算），即为粗蛋白质的含量。③滴定(NH4)2B4O7+2HCl+5H2O=2NH4Cl+4H3BO32.主要仪器及试剂二、凯氏定氮法测定粗蛋白含量*01凯氏定氮瓶（或消化管）及蒸馏装置02硫酸铜03硫酸钾04硫酸052%硼酸溶液0640%氢氧化钠溶液072%甲基红082%溴甲酚绿092%甲基红及0.2%溴甲酚绿的1+5混合指示剂101mol/L的标准盐酸溶液(或1/2硫酸溶液)测定步骤二、凯氏定氮法测定粗蛋白含量*第一步样品消化称取适量样品0.5~1g（含氮量5～80mg），无损失（用滤纸包好）地放入干燥凯氏烧瓶或消化管中，