基因工程的基本操作程序课件高二下学期生物人教版选择性必修33.pptx

第3章基因工程;课标要求;→目的基因的筛选与获取

——→基因表达载体的构建

——→将目的基因导入受体细胞（转化）

——→目的基因的检测与鉴定;与载体拼接;;问题一？;1.目的基因的概念：;;;;;;启动(终止)转录;从相关的已知结构和功能清晰的基因中筛选是比较有效的方法;方法：

①人工合成（包括直接化学合成和逆转录合成）

②构建基因文库获取(P82倒数第二段第一句)

③利用PCR技术扩增目的基因（现在常用）;;;;;需要内质网和高尔基体上加工完成

大肠杆菌中生产这种糖蛋白是不可能的。;4.利用PCR获取和扩增目的基因;PCR技术;;;;PCR技术;;;★使用引物原因：DNA聚合酶只能从引物的3’端开始连接脱氧核苷酸，延伸DNA链。;PCR技术;PCR技术;PCR技术;;PCR技术;常用琼脂糖凝胶电泳;PCR应用——新冠病毒核酸检测;;;;PCR特异性扩增某片段，就获取到目的基因;;;利用PCR技术扩增目的基因，在第几轮循环产物中开始出现两条脱氧核苷酸链等长的DNA片段？比例是多少？;;不能。游离的DNA进入受体细胞，一般会直接被分解，即使可以转录翻译成蛋白质，游离的DNA片段也无法随着细胞分裂而进行复制，导致子代细胞中不再含有目的基因。;;1.基因表达载体的作用（构建目的）;目的基因

启动子（在基因上游特定的DNA片段，紧挨着转录的起始点，是RNA聚合酶识别和结合的位点，驱动开始转录）

终止子（在基因下游，终止转录的特定DNA片段）

标记基因（检测目的基因是否导入受体细胞）

另外还要有复制原点等多种调控因子;【讨论】因为细胞一般是进行选择性表达，我们该如何选择哪种启动子、终止子？;目的基因

启动子（在基因上游特定的DNA片段，紧挨着转录的起始点，是RNA聚合酶识别和结合的位点，驱动开始转录）

终止子（在基因下游，终止转录的特定DNA片段）

标记基因（检测目的基因是否导入受体细胞）

另外还要有复制原点等多种调控因子;3.基因表达载体的构建过程;;;;;【思考1】天然的质粒直接用做基因工程载体构建？;;EcoRI和HindIII;;;目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞中维持稳定和表???的过程;将目的基因导入受体细胞的方法;常用法：;3.导入方法;;①用微量注射器将含目的基因的DNA溶液直接注入子房中；

②在植物受粉后的一定时间内，剪去柱头，将DNA溶液滴加在花柱切面上，使目的基因借助花粉管通道进入胚囊。;3.导入方法;3.导入方法;;;方法：显微注射法

一般用受精卵做受体细胞

结合胚胎工程得到转基因动物;该步骤存在碱基互补配对过程吗？其他步骤呢？;筛选出具备了标记基因的性状受体细胞，就说明目的基因成功导入或改造完生物了吗？;问题四？;1.目的基因的检测与鉴定;检测目的基因是否导入;检测目的基因是否转录;检测目的基因的量，或mRNA的量——荧光定量PCR;如：检测Bt基因是否翻译成Bt抗虫蛋白;转基因生物;;;抗原抗体杂交带;多种抗虫基因

套种普通棉;1.研究人员在研究转基因烟草中外源卡那霉素抗性基因的遗传稳定性时，发现44株转基因烟草中有4株该基因的遗传不符合孟德尔遗传规律，在它们的自交后代中出现了较多的没有卡那霉素抗性的植株。请查找相关资料，尝试对这个问题作出解释。;2.八氢番茄红素合酶（其基因用psy表示）和胡萝卜素脱饱和酶（其基因用crtⅠ表示）参与β-胡萝卜素的合成。pmi为磷酸甘露醇异构酶基因，它编码的蛋白质可使细胞在特殊培养基上生长。科学家将psy和crtⅠ基因转入水稻，使水稻胚乳中富含β-胡萝卜素，由此生产出的大米称为“黄金大米”。请根据以上信息回答下列问题。;(3)请查找相关资料，了解科学家为什么要培育“黄金大米”以及当前关于“是否要推广黄金大米’”的各种争论。你还可以提出自己的看法，并与同学交流讨论。;问题五？;1.原理;(1)用微量移液器按照配比要求在微量离心管中依次加入各组分。

(2)盖严离心管的盖子，离心约10s，使反应液集中在管的底部。

(3)设置好PCR仪的循环程序，进行反应。

;①根据待分离DNA片段的大小，用电泳缓冲液配制琼脂糖溶液

一般配制质量体积比为0.8%～1.2%的琼脂糖溶液

在沸水浴或微波炉内加热至琼脂糖熔化。

稍冷却后，加入适量的核酸染料混匀。

②将温热的琼脂糖溶液迅速倒入模具，并插入合适大小的梳子，以形成加样孔。

③待凝胶溶液完全凝固，小心拔出梳子，取出凝胶放入电泳槽内;(4)鉴定：;横向水平电泳操作示意图;(4)鉴定：;缺点：只能作定性分析，不能准确定量。