4基因工程操作技术.pptx

; DNA操作技术主要有：切割、连接、缩短、加长、转录成RNA，或者合成新的DNA，化学修饰、或者去掉特殊的化学基团。

;学习内容：;1.1核酸酶;1.1核酸酶;1.1核酸酶;1.1核酸酶;1.1核酸酶;1.2连接酶;1.2连接酶;1.3聚合酶;1.3聚合酶;1.3聚合酶;1.3聚合酶;1.3聚合酶;1.3聚合酶;1.4DNA修饰酶;1.4DNA修饰酶;1.4DNA修饰酶;1.4DNA修饰酶;1.5拓扑异构酶;2限制性内切酶;2限制性内切酶;限制-修饰现象;2.1限制性内切酶的发现;2.2限制性内切酶分类;I类限制性内切酶;(II型)限制性内切酶;III型限制性内切酶;2.3限制性内切酶的命名原则;PvuI识别CGATCG，PvuII识别CAGCTG,都来自于Proteusvulgaris。

HindIII是在Haemophilusinfluenzaed株中发现的第三种酶。

EcoRI表示基因位于Escherichiacoli中的抗药性R质粒上。

;2.4限制性内切酶产物;2.4限制性内切酶产物;2.4限制性内切酶产物;2.4限制性内切酶产物;2.4限制性内切酶产物;2.5DNA分子中识别位点的数目;2.5DNA分子中识别位点的数目;;2.6反应程序;;2.6反应程序;2.7酶切结果分析;

Standardelectrophoresis(a)doesnotseparateDNAfragmentsofdifferentsizes,whereasgelelectrophoresis(b)does

;2.7酶切结果分析;放射性自显影显示DNA条带;2.8估计DNA分子的大小;Figure4.16

EstimationofthesizesofDNAfragmentsinanagarosegel.;Figure4.17

UsingarestrictionmaptoworkoutwhichrestrictionendonucleasesshouldbeusedtoobtainDNAfragmentscontainingindividualgenes.;2.9绘制DNA分子的酶切图谱;绘制酶切图谱;绘制酶切图谱;绘制酶切图谱;2.10多酶联合酶解

;Figure4.19

Ligation:thefinalstepinconstructionofarecombinantDNAmolecule.;Figure4.20

ThedifferentjoiningreactionscatalysedbyDNAlligase.

;外源DNA与载体DNA的连接;3.1相同粘性末端的连接;同种内切酶生产的粘性末端的连接;同尾酶生产的粘性末端的连接;不同酶的相同粘性末端的连接;3.2平头末端的连接;3.3不同粘性末端的连接;不同粘性末端的连接;3.4人工粘性末端的连接;;人工粘性末端的连接5‘突出末端;人工粘性末端的连接平头末端;;3.5粘端与平端的连接;1.Linkers;注意问题;2.Adaptors;Figure4.24

Thedistinctionbetweenthe5’-and3’-terminalofapolynucleotide

;Theuseofadaptors;3.6粘性末端的更换;粘性末端的更换;3.7重组率;脱磷酸化;本章重点;9、春去春又回，新桃换旧符。在那桃花盛开的地方，在这醉人芬芳的季节，愿你生活像春天一样阳光，心情像桃花一样美丽，日子像桃子一样甜蜜。10月-2010月-20Saturday,October10,2020

10、人的志向通常和他们的能力成正比例。22:37:3422:37:3422:3710/10/202010:37:34PM

11、夫学须志也，才须学也，非学无以广才，非志无以成学。10月-2022:37:3422:37Oct-2010-Oct-20

12、越是无能的人，越喜欢挑剔别人的错儿。22:37:3422:37:3422:37Saturday,October10,2020

13、志不立，天下无可成之事。10月-2010月-2022:37:3422:37:34October10,2020

14、Thankyouverymuchfortakingmewithyouonthatspl