高效纤维素降解菌的筛选、复合菌群的构建及其降解效果研究.pdf

髙效纤维素降解菌的筛选、复合菌群的构建及其降解

效果研宄

摘要

随着我国农业的快速发展，产生了大量包括水稻、小麦和玉米等秸秆在内的农

业废弃物。采用合理方式处理这些秸秆类废弃物一直是社会关注的问题。由于秸秆

的组成成分多样、结构复杂，加上自然环境因子具有多变性和不稳定性等特点，导

致秸秆在自然条件下很难被快速降解。传统农业多采用焚烧的方法，但这种方法存

在污染环境和浪费资源等不足。用生物降解菌处理秸秆类废弃物已经成为热门方

法，但目前已报道的纤维素降解菌株普遍存在产酶活性低、耐受性弱、稳定性差以

及降解效率低等问题，因此发掘适应性广、稳定性强的高效降解菌或复合菌群一直

是人们关注的热点但又是难点问题之一。为此，本研究采集了多种环境条件下的样

品，分离、培养和筛选了优势降解菌，用菌株各自的优势特点组合构建复合菌群

并优化了其产酶条件，探讨了这些复合菌群对水稻、玉米、小麦、杂草等多种纤维

素的降解效果和降解机制，旨在为进一步丰富农业秸秆降解菌资源库和开发纤维素

降解复合菌剂提供参考。主要结果如下：

(1)从羊粪、牛粪、鸡粪、尾矿地、堆肥、松树林、杂树林、红树林、河塘底

泥、稻田和菜地等多样化环境中采集了样品，分离出112株纤维素降解菌；刚果红

染色平板显示，74株菌有水解圈，44株菌的D/d2.5。根据内切葡聚糖酶（CMCase)、

滤纸酶（FPA)、P-葡萄糖苷酶（P-Gase)和葡聚糖酶外切酶（C1)等四种降解酶活

力的测试结果复筛了上述44株菌，获得酶活性较高的22株菌；菌株JBN1、CY4-2、

YF9的四种降解酶活性均显著高于其它菌株；在JBN1、CY4-2和YF9菌株中，JBN1

菌株的CMCase酶、FPA酶及P-Gase酶活性均显著最高，均值分别为30.58Uml-1、

13.18Uml-1、10.35Uml-1；菌株CY4-2的C1酶活力显著最高，均值为8.12Uml-1。

滤纸崩解实验表明，在复筛的22株菌中，菌株CY4-2、JBN1、YF9和H17对滤纸

具有较好的降解效果，其中CY4-2、JBN1、YF9菌株使得7天后滤纸条均明显断裂

成片状，H17菌株的滤纸边缘开始出现明显降解。16SrDNA基因序列分析结果显

示，CY4-2、JBN1、YF9和H17分别为粪便芽孢杆菌(Bacillmstercori)、枯草芽孢

杆菌(Bacillussubtilis)、贝莱斯芽抱杆菌（Bacillusvelezensis)和红树林杆菌

(Mangrovibacterplantisponsor)，其中H17为新发现的菌株。

(2)基于拮抗实验构建了11组复合菌群。单因素方差分析表明，四种降解酶

活性间存在显著性差异p0.05);L（SD多重比较分析结果表明，11组复合菌群间，

JC复合菌群（JBN1+CY4-2)的CMCase和C1酶的活性均显著最高，其均值分别

I

为33.86Uml-1、10.82Uml-1;FPA酶活性次之，均值为15.96Uml-1;JYCH复合

菌群（CY4-2+JBN1+YF9+H17)的FPA酶活力显著最高，均值为19.11Uml-1，而

CMCase和C1酶活性次之，均值分别为11.21Uml-1、6.61Uml-1；JC和JYCH复

合菌群间的P-Gase酶活力无显著差异，但均显著高于其他复合菌群。CMCase酶的

优化实验表明，JC复合菌群最优条件为：碳源为秸秆（水稻)、28h的培养时间、

34°C的培养温度、初始pH为6;JYCH复合菌群最优条件为：CMC(羧基甲基纤

维素钠）为碳源、26h的培养时间、41°C的培养温度和初始pH