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细菌内毒素检查法培训

培训讲师：缪培训时间：2020.11

一、细菌内毒素简介

u细菌内毒素是G-菌细胞壁个层上的特有结构，可激活中性粒细胞，引起发热，主要化学成分为脂多糖。

u细菌内毒素广泛存在。如自来水中含内毒素的量为1至100EU/ml。当内毒素通过消化道进入人体时

并不产生危害，但内毒素通过注射等方式进入血液时则会引起不同的疾病。因此，生物制品类、疫苗

类等制剂必须经过细菌内毒素检测试验合格后才能使用。

u1956年美国人Bang发现美洲鲎血液遇革兰氏阴性菌时会产生凝胶。其后Levin和Bang又搞清楚微量

革兰氏阴性菌内毒素也可以引起凝胶反应，从而创立了鲎试剂检测法。由于鲎试剂法简单﹑快速﹑灵

敏﹑准确，已广泛用于临床、制药工业药品检验等方面。

u中国兽药典收录了2种细菌内毒素检查法：

凝胶法：利用鲎试剂与细菌内毒素产生凝集反应的原理来定性检测或半定量内毒素。

浊度法（动态和终点）：利用鲎试剂与内毒素反应过程中的浊度变化定量测

定内毒素。

光度测定法

显色基质（比色）法（动态和终点）：利用鲎试剂与内毒素反应过程中及产生的

凝固酶使特定底物释放出呈色团的多少来定量测定内毒素。

二、检查依据

Ø2015年版《中国兽药典》第一部

Ø1143细菌内毒素检查法

三、鲎试剂反应原理-动态浊度法

四、检查法/干扰试验步骤

开机：预热30min0.8mlBET水，混合15min

u0.5ml样品+0.5mlBET检查用水

0.2mlE100u样品处理

E10

1.8ml检查用水

u样品内毒素溶液

标曲C稀释0.4mlE100.5ml+0.5mlE0.5

E2.0

1.6ml检查用水

0.2mlE2.0

E0.25

1.4ml检查用水

u复溶

0.2mlE0.25

E0.03125

1.4ml检查用水

u加样：阴性对照（2支）：100ulBET检查用水+100ul鲎试剂溶液（同时点击开始）

标准曲线：100ulE0.03125内毒素溶液+100ul鲎试剂溶液

100ulE0.25内毒素溶液+100ul鲎试剂溶液

100ulE2.0内毒素溶液+100ul鲎试剂溶液

样品：100ul样品S1+100ul鲎试剂溶液

100ul样品B1+100ul鲎试剂溶液

五、结果分析

≧0.980（标准曲线可靠性试验成立）

50%≦R≦200%（干扰试验通过）

u回收率不在指定范围：须按“凝胶法干扰试验”中的方法（稀释倍数增大、过滤、中和、透析或加