酶非水相催化.ppt

有机介质中含两类水：结合水、游离水；在结合水不变的条件下，体系含水量的变化对酶催化活性影响不大；然而在一些体系中，溶剂和底物性质对酶活力也有直接或间接影响；为了排除溶剂对最适含水量的影响，Halling建议用水活度（aw）描述有机介质中酶催化活力与水的关系：水活度：体系中水的逸度与纯水逸度之比；用体系中水蒸汽压与相同条件下纯水蒸汽压之比表示；Aw=P/PoP：一定条件下体系中水的蒸汽压Po:相同条件下纯水的蒸汽压水活度与溶剂极性大小无关，最适含水量与溶剂极性成正比，故采用水活度作参数更确切；3.水活度（activityofwater)第22页，共57页，星期日，2025年，2月5日有机溶剂主要通过以下三种途径发生作用:一是有机溶剂与酶直接发生作用通过干扰氢键和疏水键等改变酶的构象从而导致酶的活性被抑制或酶的失活;二是有机溶剂和能扩散的底物或反应产物相互作用影响正常反应的进行;三是有机溶剂还可以直接和酶分子周围的水相互作用三有机溶剂对有机介质中酶催化的影响第23页，共57页，星期日，2025年，2月5日1.有机溶剂对酶结构与功能的影响在水溶液中酶分子均一地溶解在水溶液中，较好地保持其构象；有机溶剂中酶分子不能直接溶解，因此根据酶分子特性与有机溶剂特性不同，其空间结构的保持也有不同。有些酶在有机溶剂作用下，其结构受到破坏；有的酶分子则保持完整；第24页，共57页，星期日，2025年，2月5日（1）有机溶剂对酶分子表面结构的影响：由于酶分子与溶剂的直接接触，酶分子表面结构发生变化；（2）有机溶剂对酶活性中心结合位点的影响：通过减少整个活性中心的数量，溶剂对酶的活性中心产生影响，活性中心数目丧失的多少取决于溶剂中的疏水性大小。Why？溶剂与底物竞争酶的活性中心结合位点，溶剂为非极性，影响更明显，溶剂分子能渗透入酶的活性中心，降低活性中心的极性，增加酶与底物的静电斥力。第25页，共57页，星期日，2025年，2月5日（1）有机溶剂对结合水的影响一些相对亲水性的有机溶剂能够夺取酶表面的必需水而导致酶失活。酶失水的情况与溶剂的介电常数和疏水性参数有关。由于酶与溶剂竞争水分子，体系的最适含水量与酶的用量及底物浓度有关。2.有机溶剂对酶活性的影响第26页，共57页，星期日，2025年，2月5日（2）溶剂属性(极性)与酶活力的定量关系酶在不同的有机溶剂中活力差别很大；研究最多的是酶活力与溶剂极性参数lgP之间的关系；P：指溶剂在正辛烷与水两相中的分配系数，lgP越大，极性越小；Laane的实验发现：lgP2的极性溶剂中，由于溶剂极性强，易夺取酶分子表面水层而降低酶的活力。lgP4，酶具有较高活力，此类溶剂较理想。2lgP4，酶活力中等。第27页，共57页，星期日，2025年，2月5日３、有机溶剂对底物和产物分配的影响溶剂能直接或间接地与底物和产物相互作用。溶剂能改变酶分子必需水层中底物或产物的浓度。①有机溶剂极性小，疏水性强，疏水性底物难于进入必需水层；②有机溶剂极性过强，亲水性强，疏水性底物在有机溶剂中溶解度太低；故选择2≦lgp≦5的有机溶剂作为有机介质为宜。第28页，共57页，星期日，2025年，2月5日第三节酶在有机介质中的催化特性

有机溶剂的存在,改变了疏水相互作用的精细平衡,从而影响到酶的结合部位.有机溶剂会改变底物存在状态.结果影响酶的稳定性和酶的底物特异性,立体选择性,区域选择性和化学键选择性.第29页，共57页，星期日，2025年，2月5日一、底物专一性有机介质中酶活性中心结合部位与底物的结合状态发生改变,致使酶的底物特异性发生改变;水溶液中底物与酶活性中心结合靠疏水作用;有机介质中有机剂与底物的疏水作用更强;①N-乙酰-L丝氨酸乙酯②N-乙酰-L-苯丙氨酸乙酯疏水性:②﹥①介质水辛烷蛋白酶②﹥①①﹥②水解速度底物第30页，共57页，星期日，2025年，2月5日底物专一性(续)不同的有机介质，酶的底物专一性也不一样；极性较强的有机溶剂中,疏水性较强的底物易反应;极性较弱的有机溶剂中,疏水性较弱的底物易反应;①N-乙酰-L丝氨酸乙酯②N-乙酰-L-苯丙氨酸乙酯疏水性:②﹥①二氯甲烷吡啶枯草杆菌蛋白酶①﹥②+丙醇(极性较强)底物介质反应速度②﹥①第31页，共57页，星期日，2025年，2月5日二、对映体选择性（enantioselectivity)又称立体选择性或立体异构专一性，是酶在对称的外消旋化合物中识别一种异构体的能力大小的指标；立