实验11染色体分带技术.pptVIP

实验11

染色体分带技术一、实验目的了解染色体分带技术的原理及应用了解染色体G带和C带显示的原理掌握染色体G带和C带显色技术流程***二、实验原理人们用物理、化学因素处理后，再用染料对染色体进行分化染色，使每条染色体上出现明暗相间，或深浅不同带纹的技术称为显带技术（bandingtechnique）。染色带的数目、部位、宽窄和着色深浅均具有相对稳定性，所以每一条染色体都有固定的分带模式，即称带型。染色体带型是鉴别染色体的重要依据。**二、实验原理*G带是将处于分裂中期的细胞经胰酶或碱、热、尿素等处理后，再经吉姆萨染料染色后所呈现的区带，是目前被广泛应用的一种带型。其特性是显带方法简单恒定，带型稳定，保存时间长。一般认为，易着色的阳性带为含有AT多的染色体节段，在间期核呈固缩状态，而且是DNA晚复制区之一，有相当一部分中度重复序列DNA可能在G带区；相反，含GC多的染色体段则不易着色。也有人认为，Giemsa染料在G带区是与DNA结合，而且与结合DNA的染色质非组蛋白有关。总的来说，G显带的机制还未搞清。C带是染色体标本经强碱（NaOH或Ba(OH)2）热处理后，在着丝粒周围区域和异染色质区经Giemsa染成深色，而染色体两臂的常染色质部分仅有浅淡轮廓。这是一种染色体上不显示带纹的特殊显带法，主要显示着丝粒区和异染色质区的变化。*二、实验原理双翅目昆虫(果蝇、摇蚊等)幼虫期的唾腺细胞很大，其核内的染色体称为唾腺染色体。由于它们比普通染色体大100-150倍，宽约5μm，长约400μm，因而也称为巨大染色体。另外唾腺染色体经多次复制而不分开，所以又称作多线染色体。唾腺染色体经染色后出现深浅不同，疏密有别的横纹，且其数目和位置常常是恒定的，标志着物种的特征。**三、实验仪器材料洋葱、蚕豆、大蒜根尖果蝇唾腺NHCl溶液Ba(OH)2溶液Giemsa染液显微镜01*01*01四、实验步骤**四、实验步骤**四、实验步骤唾腺呈半透明，球棒状，前端较细，后端粗钝，有时成对粘在一起成“V”字型，其外侧有时附有乳白或淡黄色的脂肪，此时应保留唾腺形态的完整，因为食道和肠管也是半透明的，如果唾腺不完整，就很难判断唾腺和肠道的取弃。**四、实验步骤*果蝇唾腺染色体制片把唾腺剔出移到玻片的干净处，并清除其余器官和组织。如果唾腺上附有脂肪，应把乳白色或淡黄色的脂肪清除干净，保留半透明的唾腺。把多余的生理盐水用吸水纸吸干，加一滴1N盐酸；室温下水解2分钟，然后吸干。空气干燥一周*前处理：根尖用0.1%秋水仙素溶液处理4～12小时。固定：用水洗净处理过的根尖，经Carnoy固定液固定2-24小时，换入70%酒精保存。解离：取出根尖，用蒸馏水洗净，放入1NHCl中60℃解离8～10min，再用蒸馏水洗净。低渗：倒去酶液，用蒸馏水慢慢冲洗2次，然后在蒸馏水中浸泡30min。后固定:取出材料于载片，滴加新鲜Carnoy固定液，固定10-30min涂片：用镊子将材料捣碎，边捣边加固定液，去掉大块残渣。空气干燥一周四、实验步骤植物根尖染色体制片*四、实验步骤将制好的染色体标本，置72℃～75℃烤箱中烤片3h。放入预温至37℃的0.025%胰酶溶液中（pH=7.2～7.4）消化1min左右，每次的作用时间并不完全相同，可先试一张片子，再根据显带效果调整胰酶作用时间。在Giemsa染液中染色10min，自来水冲洗干净，晾干后，即可阅片。镜检：在显微镜高倍目镜下检查显带标本，在染色体上若出现清晰的深浅相间的带型，即为可取标本，可供摄像分析G带显色*四、实验步骤制片、烤片同G显带技术（65℃，2小时）。染色体标本在室温下用0.1NHCl水解15分钟后蒸馏水冲洗。2%Ba(OH)2，65℃处理10分钟后蒸馏水冲洗。2×SSC，65℃处理1小时。冲洗冷却后用1：10Giemsa稀释液染色7分钟。冲洗后晾干，镜检。C带显色*五、实验结果G带显色