细菌的非培养检测方法.pptVIP

PCR在临床细菌检验中的应用*细菌的耐药性检测根据耐药基因设计不同引物；可扩增并检出耐药基因；如耐甲氧西林葡萄球菌mecA基因等的检测。分子生物学技术核酸杂交斑点杂交菌落原位杂交PCR生物芯片*Southern印迹Northern印迹普通PCR荧光PCR基因芯片蛋白芯片*基因芯片（genechip）基因芯片又称DNA芯片DNA微阵列(DNAmicroarray)寡核苷酸阵列(otigonucleotidearray)*基因芯片（genechip）将数以万计的DNA探针固化于支持物表面上，产生二维DNA探针阵列，然后与标记的样品进行杂交，通过检测杂交信号来实现对生物样品快速、并行、高效的检测或医学诊断。其分析步骤可分为：芯片的制备样品处理杂交反应检测及数据处理*

基因芯片制备基因芯片的原位合成法是基于组合化学的合成原理，它通过一组定位模板来决定基片表面上不同化学单体的偶联位点和次序，如要合成AGCT四种碱基所有序列组合，其流程见图。*

基因芯片的制备-原位合成基因芯片原位合成原理示意图样品的扩增：在标记和分析前对样品进行适当程度的扩增，以提高阅读灵敏度；待测样品的标记：多采用荧光标记方法，对于阵列密度较小的基因芯片可以用同位素检测法。*

基因芯片制备-样品的处理cDNA基因芯片与靶基因的杂交过程与常规的分子杂交过程基本相同；用于检测基因表达，较长的杂交时间，高的严谨性，高的样品浓度和低温度；用于突变检测，因要鉴别出单碱基错配，需要更高的杂交严谨性和更短的时间。*

基因芯片制备-杂交反应检测方法很多，如荧光显影法、质谱法、化学发光和光导纤维等。检测系统主要由信号产生、信号收集及传输、信号处理及成像三个部分组成。使用最广泛的是荧光显影法。*

基因芯片制备-结果检测分析*基因芯片（genechip）“细菌感染通用基因芯片诊断”系统将常见呼吸道病原菌的探针均匀地固定在玻片上;再将样品核酸体外扩增并做荧光标记；与基因芯片微阵列杂交；通过专用扫描仪观察，杂交成功的病菌基因就象藏上了一顶发光的“帽子”。蛋白质芯片（proteinchip）按特定排列方式，在经过特殊处理的固相材料表面固定了许多蛋白质分子。这些蛋白质分子可以是抗原、抗体及配体等；检测相应的抗体、抗原及蛋白质；可用于肿瘤标志物的联合检测；简便、快速、高通量。**细菌的非培养检测方法分子生物学技术三免疫学技术二毒素的检测一一般细菌毒素可分为两类：一类为外毒素（Exotoxin），它是一种毒性蛋白质，是细菌在生长过程中分泌到菌体外的毒性物质。产生外毒素的细菌主要是革兰氏阳性菌。如白喉杆菌、破伤风杆菌、肉毒杆菌、金黄色葡萄球菌以及少数革兰氏阴性菌；另一类为内毒素（Endotoxin）：内毒素是革兰氏阴性细菌细胞壁中的一种成分，内毒素的主要化学成分是脂多糖中的类脂A成分。细菌在生活状态时不释放出来，只有当细菌死亡自溶或粘附在其它细胞时，才表现其毒性，所以叫做内毒素。内毒素耐热而稳定，抗原性弱。各种细菌的内毒素的毒性作用较弱，大致相同，可引起发热、微循环障碍、内毒素休克及播散性血管内凝血等。其化学成分广泛分布于革兰氏阴性菌（如大肠杆菌、布氏杆菌、伤寒杆菌、变形杆菌、沙门氏菌等）及其它微生物（如衣原体、立克次氏体、螺旋体等）。*由于内毒素是细菌死亡裂解或自溶引起的，因此环境中大量存在内毒素。当内毒素通过机体消化道等方式时并无危害，少量通过注射等方式进入血液后被肝脏枯否细胞灭活，不造成机体损害。内毒素大量进入血液就会引起发热反应—“热原反应”。医院临床在使用药品注射剂时，常有发生冷感、寒战、发热、头痛、恶心、呕吐、肤色灰白、休克、严重时导致死亡，这种症状称为热原反应。内毒素大量进入、集聚于血液中，超过机体各自卫系统的清除能力，则可导致不同程度的内毒素血症。对于易于引入内毒素的药品医疗器械等必须通过内毒素检测。内毒素的检测常用家兔热原法和鲎试验法。*由于细菌内毒素要在高温250℃30分钟才能完全灭活，所以在制药工业和一次性医疗器械及血袋等生产工艺中都是让人头疼的问题，检测使用的各种玻璃器材均应严格清除内毒素后才能使用，我们提供的成品试验器材要经过7道严格工序才达到要求。内毒素浓度越高成胶时间就越快，即反应速度快*鲎的长相既像虾又像蟹，人称之为“马蹄蟹”,鲎有“活化石”之称,每当春夏季鲎的繁殖季节，雌雄一旦结为夫妻，便形影不离，肥大的雌鲎常驮着瘦小的丈夫蹒跚而行。此时捉到一只鲎，提起来便是一对，故鲎享“海底鸳鸯”之美称。鲎有四只眼睛,头胸甲前端有0.5毫