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EAE模型诱导和细胞培养

张颖

实验性自身免疫性脑脊髓膜炎小鼠模型（EAE）

实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）是一种

以特异性致敏的CD4+T细胞介导为主的，以中

枢神经系统内小血管周围出现单个核细胞浸润

及髓鞘脱失为特征的自身免疫性疾病，是人类

多发性硬化（MS）的理想动物模型，在临床

神经免疫学的研究中具有重要意义。

实验动物及试剂的选择

实验动物：C578-10周雌性小鼠

实验试剂：①抗原的选择：MOG35-55多肽

MOG可激活体内T细胞，使之穿过血脑屏障，攻击自身神经髓鞘的MOG抗原，

从而导致中枢神经白质脱髓鞘，引起EAE。

②佐剂的选择：完全弗氏佐剂

抗原佐剂为非特异性免疫增强剂，它可改变抗原的物理性状，延长抗原在体内

的储留时间，刺激抗原提呈细胞及淋巴细胞，从而增强和扩大免疫应答效果，它还能

引起迟发性血脑屏障通透性增加和自身免疫反应。

③百日咳菌素（PT）的选择

百日咳毒素毒素能增加血管壁的通透性和血管表面粘附分子的表达，有利于致

敏的T细胞透过血脑屏障，攻击神经髓鞘，造成对脑、脊髓组织的免疫损伤。

具体试剂信息

MOG35-55：10mg/支，以1ml无菌DDW溶解，浓

度为10μg/μl

CFA+TB：一支TB粉末100mg，溶于两支AIF（20

ml）中,浓度为5μg/μl

PT：购买PT为50μg每瓶，加500μl无菌DDW，浓

度:100ng/μl

模型制备方法

①乳化抗原两实验人员配合，快速来回推送注射器针栓1小时以上，该操作于冰上进行。

乳化完，取一器皿如培养皿盛放自来水，拧下一注射器，滴加乳剂于水上，观察乳剂是否

快速弥延散。若弥散，应长乳化时间。若无弥散,则为“油包水”状态,可用于免疫动物。

（开始时阻力会非常大）

②PT注射液准备:按200μl/只小鼠，计算免疫所需体积，因针头残留等原因，实际准备体积

v应大于所需体积。将上述准备好的PT溶液用PBS稀释100倍，置于15ml离心管中。

将稀释后的PT包裹锡箔纸避光，置于冰上备用。

③免疫小鼠麻醉、编号：水合氯醛麻醉，腹腔注射(左)，marker笔标记尾巴。2）腹腔注

射PT200μL（右）3）将1ml注射器连于三通管，推送10ml注射器将乳剂推送至1ml

注射器。注意控制用力，防止注射器滑脱。于两后肢连线及两前肢连线与后正中线交点部

皮下各注射100μl乳化的抗原。注射后局部应有凸起。4）48h后，再次免疫，腹腔注

射PT200μl。

发病时间及发病高峰统计

评分标准

小结

EAE是由针对CNS髓鞘发生免疫攻击的CD4+T介导的自身免疫性疾病，

抗原致敏的T细胞穿过血脑屏