DB37T 1780-2011 水产苗种中孔雀石绿、结晶紫、亚甲基蓝及其代谢物残留量的测定 液相色谱法　　.docxVIP

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DB37

山东省地方标准DB37/T1780—2011

水产苗种中孔雀石绿、结晶紫、亚甲基蓝及其代谢物残留量的测定液相色谱法

2011-01-06发布2011-03-01实施

山东省质量技术监督局发布

I

DB37/T1780—2011

前言

本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。本标准由山东省海洋与渔业厅提出。

本标准由山东省海洋渔业标准化技术委员会归口。

本标准起草单位：山东省海洋水产研究所、山东省水产品质量检验中心。

本标准主要起草人：宫向红、刘义豪、刘慧慧、徐英江、秦华伟、任传博、邹荣婕、邓旭修。

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DB37/T1780—2011

水产苗种中孔雀石绿、结晶紫、亚甲基蓝及其代谢物残留量的测定液相色谱法

1范围

本标准规定了水产苗种中孔雀石绿(MG)、结晶紫(CV)、亚甲基蓝(MB)及其代谢物残留量的液相色谱测定方法。

本标准适用于水产苗种中孔雀石绿、结晶紫、亚甲基蓝及其代谢物隐色孔雀石绿(LMG)、隐色结晶

紫(LCV)、天青A(AZ-A)、天青B(AZ-B)、天青C(AZ-C)残留量的测定。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

《水产苗种违禁药物抽检技术规范》农业部1192号公告-1-2009

3原理

样品中残留的孔雀石绿、结晶紫、亚甲基蓝及其代谢物用乙腈-乙酸铵缓冲液提取，二氯甲烷液液萃取，固相萃取柱净化，反相色谱柱分离，紫外检测器检测，外标法定量。

4试剂

4.1除另有规定外，所有试剂均为分析纯，试验用水符合GB/T6682一级水的标准。4.2乙腈：色谱纯。

4.3二氯甲烷：色谱纯。4.4甲醇：色谱纯。

4.5甲酸。

4.6冰乙酸。4.7二甘醇。4.8氨水。

4.9乙酸铵。

4.10盐酸羟胺。

4.11对-甲苯磺酸。

4.1220%盐酸羟胺溶液：称取盐酸羟胺20g，溶解于100mL水中。

4.131.0mol/L对-甲苯磺酸溶液：称取对-甲苯磺酸19.0g，溶解于100mL水中。

4.140.125mol/L乙酸铵缓冲溶液：称取9.64g乙酸铵溶解于1000mL水中，冰乙酸调pH到4.5。

4.15定容液：乙腈+乙酸铵缓冲溶液（20+80，v/v）。

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DB37/T1780—2011

4.16标准品：孔雀石绿（malachitegreen，MG）、结晶紫（crystalviolet，CV）、亚甲基蓝（methyleneblue，MB）、天青A（azureA，AZ-A）、天青B（azureB，AZ-B）、天青C（azureC，AZ-C）、隐色孔雀石绿（leucomalachitegreen，LMG）、隐色结晶紫（leucocrystalviolet，LCV），纯度均大于98%。

4.17标准储备溶液：准确称取适量的孔雀石绿、隐色孔雀石绿、结晶紫、隐色结晶紫标准品，用乙腈分别配制成100μg/mL的标准储备溶液；准确称取适量的亚甲基蓝、天青A、天青B、天青C标准品，用甲醇分别配制成100μg/mL的标准储备溶液。-18℃避光保存，有效期6个月。

4.18混合标准中间液（1.0μg/mL）：分别准确吸取1.00mL亚甲基蓝、天青A、天青B、天青C、孔雀石绿、隐色孔雀石绿、结晶紫、隐色结晶紫的标准储备溶液至100mL容量瓶中，用乙腈稀释至刻度，配制成1.0μg/mL的混合标准中间液。-18℃避光保存，有效期1个月。

4.19混合标准工作溶液：根据需要，临用时准确吸取一定量的混合标准中间液，用定容液准确稀释至适当浓度。

4.20洗脱液A：甲醇50mL，二氯甲烷50mL，氨水5mL，或按其比例，混匀。

4.21洗脱液B：洗脱液A100mL，加甲酸1mL，或按其比例，混匀。

5仪器与设备

5.1高效液相色谱仪：配紫外检测器。5.2电子天平：感量0.00001g。

5.3天平：感量0.01g。

5.4离心机：4000r/min。5.5旋涡振荡器。

5.6固相萃取装置。5.7旋转蒸发仪