动物细胞与组织培养.pptVIP

四细胞培养设施

实验室设计细胞培养是一种无菌操作技术，要求工作环境和条件必须保证无微生物污染和不受其它有害因素的影响。细胞培养室和设计原则是防止微生物污染和有害因素影响，要求工作环境清洁、空气清新，干燥和无烟尘。细胞培养室的设计实施原则一般是无菌操作区设在室内较少走动的内侧，常规操作和封闭培养于一室，而洗刷消毒在另一室。风淋培养室准备室缓冲室准备室细胞培养实验室培养室专用于组织细胞培养的空间，应包括更衣间、缓冲间、操作间。01内设超净工作台、培养箱等细胞培养的必要设备，应具备紫外消毒、通风及温控设施。02操作间放置净化工作台及二氧化碳培养箱、离心机及倒置显微镜等。03缓冲间可放置电冰箱、冷藏器及毒好的无菌物品等04风淋室：风淋室是生物洁净室的理想配套设备，它不仅可以清除人体和物品表面附着的尘埃，减少带入洁净室的灰尘量，而且兼有气闸室的功能，可防止非洁净空气的侵入。风淋室的板壁采用轻质隔热夹芯钢板，吹淋板采用进口不锈钢制作，吹淋口方向可调，风淋时间可在30-99秒间的调整。风淋室可以配合加热器，冬天可以加热，温度可调，一般控制温度在30-35℃较为适宜。

也称净化工作台，分为侧流式、直流式和外流式三大类。哺乳动物离体细胞培养和体内细胞一样,需要在恒足温度下才能生存,温差变化一般不应超过0.5度，因此培养箱对温度应具有较高灵敏度。CO2培养箱的优点在于能恒定地供应一定量的CO2,一般5%即可维持培养液PH值稳定。防止污染。细胞培养的冰箱应特别注意清洁，贴附生长是大多数细胞在体内生长的基本存在方式。贴附型细胞在培养时能贴附在支技物表面生长。01如羊水细胞为贴附型细胞，常表现为成纤维型细胞和上皮细胞生长。02（一）贴附型细胞成纤维型细胞01在培养中的细胞凡形态与成纤维细胞类似时，皆可称之为成纤维细胞。本型细胞由形态与体内成纤维细胞的形态相似而得名.除真正的成纤维细胞外，凡由中胚层间质起源的组织细胞常呈本类形态生长。02人胚肺细胞在显微镜下呈现为典型的成纤维细胞型。03成纤维细胞（2）上皮型细胞:01此类型细胞在培养器皿支持物上生长具有扁平状，02细胞呈扁平不规则多角形，中央有圆形核，细胞彼此紧密相连成单层膜。生长时彼此紧密连接成单层细胞。03生长时呈膜状移动，处于膜边缘的细胞总与膜相连，很少单独行动。04起源于内、外胚层的细胞如皮肤表皮及其衍生物、消化管上皮、肝胰、肺泡上皮等皆成上皮型形态。05Hela细胞呈现为典型的上皮细胞型。上皮型细胞此型细胞不很稳定，有时亦难和其它型细胞区别。在一定的条件下，由于细胞密度增大联成片后，可呈类似多角型或成纤维细胞形态。本型细胞在支持物上散在生长，一般不连成片。细胞质经常伸出伪足或突起，呈活跃的游走或变形运动，速度快且不规则。体外培养的游走型细胞具有类似巨噬细胞样的特征。主要是：单核巨噬细胞系统的细胞，淋巴细胞，肿瘤细胞。单核巨噬细胞1、游走型细胞在支持物上分散生长，一般不连接成片、形成群落；2、细胞胞质常伸出伪足和突起。3、生长位置不固定，呈游走和变形运动，速度快、方向不规则。4、细胞内易出现色暗的吞噬性颗粒。形态上不规则的细胞，一般分胞体和胞突两部分,如神经组织细胞.（二）非附型细胞悬浮生长细胞：血液白细胞、淋巴组织细胞、某些肿瘤细胞、杂交瘤细胞、转化细胞系等。01这类细胞特点：胞体始终是球形、密度较高，培养效率高、易大规模生产。0201血清成分、培养基成分、添加成分、培养基的酸碱度、气相环境、温度等。02如,Hela细胞原本是一种上皮型癌细胞,但在过酸或过碱的条件下培养,可以呈现梭形,当酸碱度适中时又可以恢复上皮型特征。五.影响细胞形态学特征的因素第三节动物组织细胞培养要求二培养工具:培养瓶、培养皿、培养管、多孔培养板等。细胞培养以玻璃器皿为主。器皿应选择透明度好、无毒、中性硬度玻璃制品。根据培养细胞种类要求不同培养瓶的形态各异，用于细胞传代培养的细胞要求瓶壁厚簿均匀，便于细胞贴壁生长和观察，瓶口要大小一致，口径一般不小于1cm，允许吸管伸入瓶内任何部位。三、培养条件

细胞在体外培养中所需的条件与体内细胞基本相同。【讨论】多细胞动物和人体的细胞都生活在内环境中，讨论以下问题：体外培养细胞时需要提供哪些物质？提示：充足的营养供给、适宜的温度、适宜的pH和气体环境。体外培养的细胞需要什么样的环境条件？提示：无菌、无毒的环境。2）PH：7.2-7.４当PH低于6或高于7.6时的生长会受到影响，甚至死亡。用来检测PH的变化：红色--pH7.4，橙色-