临床免疫学检验仪器与技术.ppt

第十一章

临床免疫学检查仪器与技术

施新明

目录第一节免疫荧光分析仪器与技术第二节散射比浊分析仪器与技术第三节酶免疫分析仪器与技术第四节化学发光免疫分析仪器与技术第五节自动化免疫分析仪的临床应用?

重点提醒1.自动免疫荧光染色的技术原理是什么？2.时间辨别荧光免疫分析仪的基本原理和性能特点是什么？3.散射比浊仪器的分类和原理是什么？4.比浊法检测抗原过剩的措施有哪些？5.酶联免疫分析技术的原理是什么？6.化学发光酶免疫分析的技术原理是什么？7.吖啶酯化学发光免疫分析技术的原理是什么？8.电化学发光免疫分析技术的原理和特点是什么？9.光激化学发光免疫分析技术的原理是什么？

第一节免疫荧光分析仪器与技术

一、免疫荧光染色仪器与技术（一）免疫荧光染色技术原理将荧光素标识在抗体上，免疫反应结束后使用特定波长的激发光照射标识的荧光素，荧光素吸取激发光的能量，产生可见的荧光。

一、免疫荧光染色仪器与技术（二）免疫荧光染色有关仪器1.免疫荧光染色自动操作仪用于自动化完毕血清稀释、加样、温育、清洗等检测过程。基本构造包括加样系统、清洗系统、温育系统、机械臂和软件系统等。1.条形码扫描器2.样品轨架3.样品针清洗站4.清洗站5.清洗机头6.载片托盘7.试剂架8.用于初始稀释的稀释板9.用于系列稀释的稀释板

一、免疫荧光染色仪器与技术（二）免疫荧光染色有关仪器1.免疫荧光染色自动操作仪加样系统由样品针和清洗站、样品轨架和试剂架等构成；清洗系统包括储液桶、清洗站、清洗机头、废液排除管路等部件；温育系统包括恒温器，孵育盖等；机械臂用于移动样品针、清洗机；特点：①可以替代手工操作，减少操作者的工作强度；②使免疫荧光染色过程原则化，减少人为操作误差；③清洗充足，减少非特异性的干扰。

一、免疫荧光染色仪器与技术（二）免疫荧光染色有关仪器2.全自动免疫荧光判读系统（1）技术原理：DAPI染色使荧光显微镜可以定位细胞；拍摄FITC染色的荧光图像；智能数字荧光图像识别软件进行荧光模型的判读。

一、免疫荧光染色仪器与技术（二）免疫荧光染色有关仪器2.全自动免疫荧光判读系统荧光强度判读：软件自动分析荧光图片中的每个像素点的荧光强度，根据荧光强度的数值来判读荧光成果。荧光模型的判读：①模式识别原理计算机系统将图形转化为数字参数，与数据库中存储的大量数据比对，判读荧光模型。需要计算能力强大的计算机；有学习能力，识别能力会随数据库内数据的累积而提高。

一、免疫荧光染色仪器与技术②图形识别算法原理；软件系统对阳性成果模拟合成一张三维全息图，测定三维图的峰和谷，转换成数值信息，与软件中设定的条件进行匹配，所需设备简朴。

一、免疫荧光染色仪器与技术（2）基本构造：重要由全自动荧光显微镜、成像系统、机械与控制系统、计算机和软件系统构成。1、自动荧光显微镜；2、冷CCD摄像头；3、计算机；4、荧光准直仪；5、显微镜控制器；6、LED荧光光源发生器

二、时间辨别免疫荧光分析仪器与技术（一）时间辨别免疫荧光分析技术原理镧系元素的荧光寿命比非特异性荧光长，运用这一特点，使用镧系三价稀土离子及其螯合物作为标识物标识抗体（或抗原）进行免疫反应，待反应体系中血清、溶剂和其他成分的短寿命背景荧光完全衰变后，再测量镧系元素的特异性荧光，以有效地减少本底荧光的干扰。这种技术称时间辨别荧光免疫分析（TRFIA）。

二、时间辨别免疫荧光分析仪器与技术（一）时间辨别免疫荧光分析技术原理1.解离增强镧系元素荧光免疫分析增强液可使镧系元素形成具有高强度荧光的稳定螯合物。增强液使Eu3+标识的抗体抗原复合物pH降至2～3，有助于Eu3+从复合物上完全解离下来。游离的Eu3+被増强液中的螯合剂所螯合、再与增强液中的β-二酮体生成一种Eu3+在其内部的保护性胶态分子团。新生成的螯合物在紫外光激发下能发射出很强的荧光，信号的增强效果可达上百万倍。2.FIAgen分析系统用双功能螯合剂4,7-二（氯磺酰基）苯基-1,10-菲咯啉-2,9-二羧酸，并把生物素-亲和素系统引入TRFIA系统。

二、时间辨别免疫荧光分析仪器与技术（一）时间辨别免疫荧光分析技术原理3.酶放大TRFIA采用碱性磷酸酶水解5-氟水杨酸磷酸酯，生成5-氟水杨酸，在碱性条件下5-氟水杨酸可与镧系元素（Tb3+）和乙二胺四乙酸形成强荧光络合物，在激发光源激发下产生荧光。4.均相TRFA系统运用三联吡啶类化合物将镧系元素（Eu3+）和别藻蓝蛋白连接，构成能量转移效率最高的能量供体和受体对，测量前不必分离结合标识物和游离标识物，可以用双波长时间辨别免疫荧光分析仪直接测定固相荧光。

二、时间辨别免疫荧光分析仪器与技术（二）时间辨别免疫荧光分析仪的基本构造

二、时间辨别免