《动物实验技术》课件——专家讲座：玩转“基因”的实验动物.pptxVIP

动物实验技术“玩转”基因的实验动物

基因工程-基因编辑技术自1972年保罗·伯格构建了世界上第一个重组DNA分子,自此掀起了基因工程研究的热潮。半个世纪以来，基因工程技术已获得了突飞猛进的发展,取得了许多世人瞩目的成就，对农业生产、医疗卫生、轻工食品和环境卫生等诸多领域产生了巨大影响，成为生物学研究的最前沿学科。目前以基因工程技术为主体的生物技术将成为21世纪主导技术之一。

基因工程-基因编辑技术美国斯坦福大学的生物化学、荣誉教授保罗·伯格1980年诺贝尔化学奖基因工程技术为主体的生物技术已成为21世纪主导技术之一专业基础课程专业核心课程动物实验技术技术医学分子生物学技术CRISPER/Cas9在动物疾病模型构建中的应用

一、基因编辑技术对目标基因及其转录产物进行编辑（定向改造），实现特定DNA片段的加入、删除，特定DNA碱基的缺失、替换等，以改变目的基因或调控元件的序列、表达量或功能。·基因编辑的原理基本原理是通过序列特异性的DNA结合结构域和非特异性的DNA修饰结构域组合而成的序列特异性核酸内切酶，识别染色体上的DNA靶位点，进行切割并产生DNA双链断裂，诱导DNA的损伤修复，从而实现对指定基因组的定向编辑。

基因“魔剪”——CRISPER/Cas9“这项基因工具蕴含着强大的力量，影响着我们所有人。它不仅彻底改变了基础科学，而且推动了创新作物的诞生，未来还将会为突破性的新医学疗法指明方向”——诺贝尔化学委员会主席ClaesGustafsson

二、认识CRISPR-Cas9系统CRISPR-Cas9是继ZFN、TALENs等基因编辑技术推出后的第三代基因编辑技术，短短几年内,CRISPR-Cas9技术风靡全球。操作简单花费少耗时短基因功能研究遗传疾病治疗构建动物模型培育家畜新品种

基因“魔剪”——CRISPER/Cas9什么是CRISPER/Cas9？CRISPR（ClusteredRegularlyInterspacedShortPalindromicRepeats）是一系列重复的DNA序列，它们之间由独特的间隔序列分隔。这些间隔序列是细菌在以前遭受病毒侵袭时获得的病毒DNA片段。CRISPR-Cas9系统最初是在细菌中发现的一种免疫机制，用于抵御外来的病毒和质粒。Cas9（CRISPR-associatedprotein9）是一种核酸酶，能够在特定的DNA序列上切割双链DNA。

基因“魔剪”——CRISPER/Cas9CRISPER/Cas9系统的组成其中，crRNA和tracrRNA通过局部碱基配对组成gRNA(guideRNA)，gRNA与Cas9蛋白结合后引导Cas9蛋白识别和切割目标DNA序列。Cas9核酸酶crRNAtracrRNA为了方便实验设计以及提高gRNA的稳定性，JenniferDoudna和EmmanuelleCharpentier将crRNA和tracrRNA融合成一条RNA，并把其称为sgRNA(single-guideRNA)。

基因“魔剪”——CRISPER/Cas9在基因编辑中，研究人员设计了一个与目标DNA序列互补的单链RNA引导分子（sgRNA），将其与Cas9蛋白复合体一起导入目标细胞。sgRNA引导Cas9定位到目标DNA序列，并促使Cas9在该位置切割DNA双链。细胞修复切割产生的DNA断裂时，可以引入突变，从而实现基因的敲除、插入或替换。

基因“魔剪”——CRISPER/Cas9基因编辑的原理在基因编辑中，研究人员设计了一个与目标DNA序列互补的单链RNA引导分子（sgRNA），将其与Cas9蛋白复合体一起导入目标细胞。sgRNA引导Cas9定位到目标DNA序列，并促使Cas9在该位置切割DNA双链。细胞修复切割产生的DNA断裂时，可以引入突变，从而实现基因的敲除、插入或替换。

新技术应用推动了对于人类疾病的认知CRISPR-Cas9应用方式(2）基因敲入（Knock-in）当DNA双链断裂后，如果有DNA修复模板进入到细胞中，基因组断裂部分会依据修复模板进行同源重组修复（HDR），从而实现基因敲入。(3）基因抑制、基因激活（RepressionorActivation）（4）多重编辑（MultiplexEditing）将多个sgRNA质粒转入到细胞中，可同时对多个基因进行编辑，具有基因组功能筛选作用。（1）基因敲除（Knock-out）Cas9可以对靶基因组进行剪切，形成DNA的双链断裂（5）功能基因组筛选利用CRISPR-Cas9进行基因编辑可以产生大量的基因突变细胞，因此利用这些突变细胞可以确认表型的变化是否是由基因或者遗传因素导致的。

新技术应用推动了对于人类