高效液相色谱分析 (4).ppt

关于高效液相色谱分析(4)第1页，共30页，星期日，2025年，2月5日一、HPLC与GC差别1．分析对象的区别GC：适于能气化、热稳定性好、且沸点较低的样品；但对高沸点、挥发性差、热稳定性差、离子型及高聚物的样品，尤其对大多数生化样品不可检测占有机物的20%HPLC：适于溶解后能制成溶液的样品（包括有机介质溶液），不受样品挥发性和热稳定性的限制，对分子量大、难气化、热稳定性差的生化样品及高分子和离子型样品均可检测用途广泛，占有机物的80%第2页，共30页，星期日，2025年，2月5日2．流动相差别的区别GC：流动相为惰性，气体组分与流动相无亲合作用力，只与固定相有相互作用。HPLC：流动相为液体，流动相与组分间有亲合作用力，能提高柱的选择性、改善分离度，对分离起正向作用。且流动相种类较多，选择余地广，改变流动相极性和pH值也对分离起到调控作用，当选用不同比例的两种或两种以上液体作为流动相也可以增大分离选择性。3．操作条件差别GC：加温操作HPLC：室温；高压（液体粘度大，峰展宽小）第3页，共30页，星期日，2025年，2月5日1．贮液罐（滤棒，可滤去颗粒状物质）2．高压泵（输液泵）3．进样装置4．色谱柱——分离5．检测器——分析6．废液出口或组分收集器7．记录装置二、高效液相色谱仪流程图第4页，共30页，星期日，2025年，2月5日三、HPLC的特点和实际应用1、利用其高柱效（n=104片/米），有效分离极复杂体系中的痕量组分。正相色谱(流动相极性小)分离有机溶剂中的物质反相色谱(流动相极性大)分离水溶液中的物质----生化物质。2、用离子型固定相建立的离子交换色谱和离子对色谱法分析离子型体的含量。（蛋白质、氨基酸、常见阴阳离子等）3、利用多孔凝胶固定相建立空间排阻色谱法可分离高分子化合物。4、利用手性固定相可以拆分分离具有手性的化合物。第5页，共30页，星期日，2025年，2月5日§2-2基本理论和条件选择基础理论热力学理论：塔板理论——平衡理论动力学理论：速率理论——Vander方程一、塔板理论第6页，共30页，星期日，2025年，2月5日1.二、速率理论（与GC对比）第7页，共30页，星期日，2025年，2月5日2）涡流扩散项及其影响2.讨论：1）流动相流速对HPLC板高的影响（与GC对比）第8页，共30页，星期日，2025年，2月5日第9页，共30页，星期日，2025年，2月5日3）传质阻抗项及其影响第10页，共30页，星期日，2025年，2月5日第11页，共30页，星期日，2025年，2月5日1．三、影响分离的因素第12页，共30页，星期日，2025年，2月5日1.固定相与装柱方法的选择：选粒径小的、分布均匀的球形固定相（dp≤10μm）首选化学键合相，匀浆法装柱2.流动相及其流速的选择：选粘度小、低流速的流动相——甲醇，约1ml/min3.柱温的选择：选室温250C左右四、HPLC法中分离条件的选择第13页，共30页，星期日，2025年，2月5日一、液固吸附色谱法（LSC）(liquid-solidadsorptionchromatography)二、液液分配色谱法（LLC）(liquid-liquidpartitionchromatography,chemicalbondedphasechromatography三、离子色谱法（IC）（ion-exchangechromatographyandionpairchromatography)四、空间排阻色谱法（SEC）（stericexclusionchromatography§2-3各类高效液相色谱法简介第14页，共30页，星期日，2025年，2月5日1．分离机制：利用溶质