生物工程下游技术第二章-(动物细胞大规模培养和专用生物反应器).pptVIP

上节课我们学了什么？;生物反响器;第二章动物细胞大规模培养和专用生物反响器;动物细胞培养开始于上世纪初1962年,其规模逐渐扩大,开展至今已成为生物、医学研究和应用中广泛采用的技术方法(生产酶、生长因子、疫苗和单抗等)。;开展：在过去几十年来，从使用转瓶(rollerbottle)、CellCube等贴壁细胞培养，开展为生物反响器〔Bioreactor〕进行大规模细胞培养。;随着生物技术的开展，迫切需要大规模的细胞培养，以便获得大量有用的细胞表达产物。

采用玻璃瓶静置或旋转瓶的培养方法，已不能满足所需细胞数量及其分泌产物。

自70年代以来，较常见的细胞培养生物反响器有空气提升反响器，中空纤维管反响器，无泡搅拌反响器及篮式生物反响器等。

80年代以来，人们逐渐开始以生物反响器培养代替鼠腹水的方法获得单克隆抗体。;动物细胞大规模培养技术：

〔large-scaleculturetechnology〕

定义：指在人工条件下〔设定pH、温度、溶氧等〕，在细胞生物反响器中高密度大量培养动物细胞用于生产生物制品的技术。;鸡胚、猪肾、猴肾、地鼠肾等多种原代细胞

人二倍体细胞

cho〔中华仓鼠卵巢〕细胞

BHK-21(仓鼠肾细胞)

Vero细胞(非洲绿猴肾传代细胞，是贴壁依赖的成纤维细胞)等。;个性化培养基是胞细培养基的开展方向;图8.1细胞培养瓶;口蹄疫疫苗、狂犬病疫苗、牛白血病病毒疫苗、脊髓灰质炎病毒疫苗、乙型肝炎疫苗、疱疮病毒疫苗、巨细胞病毒疫苗、α及β干扰素、血纤维蛋白溶酶原激活剂、凝血因子Ⅷ和Ⅸ、促红细胞素、松弛素、生长激素、蛋白C、免疫球蛋白、尿激酶、激肽释放酶及200种单克隆抗体等。;6.原代培养细胞一般繁殖50代即退化死亡;●非贴壁依赖型细胞：无需附着于固相外表即可生长，包括血液、淋巴组织细胞、许多肿瘤细胞及某些转化细胞。

;“贴壁单核”细胞培养;知识回忆;植物细胞〔组织〕培养流程;大规模动物细胞培养工艺流程图;大规模培养动物细胞的方法：

贴壁培养

悬浮培养

固定化培养;一、贴壁培养〔attachmentculture〕;2、贴壁培养的优点：

●容易更换培养液：细胞紧密黏附于固相外表，可直接倾去旧培养液，清洗后直接参加新培养液。

??容易采用灌注培养，从而到达提高细胞密度的目的；因细胞固定外表，不需过滤系统。

●当细胞贴壁于生长基质时，很多细胞将更有效的表达一种产品。

●同一设备可采用不同的培养液/细胞的比例。

●适用于所有类型细胞。;灌注培养;3、贴壁培养的缺点：

与悬浮培养法相比，

●扩大培养比较困难，投资大；

●占地面积大；

●不能有效监测细胞的生长；;4、细胞贴壁的外表：

要求具有净阳电荷和高度外表活性。对微载体而言还要求具一定电荷密度；假设为有机物外表，必须具有亲水性，并带阳电荷。;5、贴壁培养系统：

主要有转瓶、中空纤维〔后面专题介绍〕、玻璃珠、微载体系统〔后面介绍〕等。;转瓶培养系统：

为最初采用系统，一般用于小量培养到大规模培养的过渡阶段，或作为生物反响器接种细胞准备的一条途径。细胞接种在旋转的圆筒形培养器——转瓶中，培养过程中转瓶不断旋转，使细胞交替接触培养液和空气，从而提供较好的传质和传热条件。;转瓶培养的优、缺点;二、悬浮培养〔suspensionculture〕

指细胞在反响器中自由悬浮生长的过程。主要用于非贴壁依赖型细胞培养，如杂交瘤细胞等，是在微生物发酵的根底上开展起来的。;用人源或动物来源的蛋白或激素代替动物血清的一种细胞培养方式，它能减少后期纯化工作，提高产品质量，正逐渐成为动物细胞大规模培养的新方向。;三、固定化培养〔immobilizationculture〕：;1、吸附法:

用固体吸附剂将细胞吸附在其外表而使细胞固定化的方法称为吸附法〔adhesion〕。操作简便、条件温和、是动物细胞固定化中最早研究使用的方法。

缺点：载体的负荷能力低，细胞易脱落。微载体培养和中空纤维培养是该方法的代表，稍后专门介绍。;2、共价贴附法:

利用共价键将动物细胞与固相载体结合的固定化方法称为共价贴附法〔attachmentbycovalentbonding〕。此法可减少细胞的泄漏，但须引入化学试剂，对细胞活性有影响，且因贴附而导致扩散限制小，细胞得不到保护。;3、离子/共价交联法:

双功能试剂处理细胞悬浮液，会在细胞间形成桥而絮结产生交联作用，此固定化细胞方法称为离子/共价交联法〔cross-linkingbycovalentbondin