染色体与基因补充.ppt

染色體外的DNA質粒2.細胞器基因組1.質粒DNA結構與功能質粒(plasmid) 是某些細菌和真核生物細胞中存在於染色體以外的DNA分子，1kb-200kb不等，大多數細菌的質粒是雙鏈、共價閉合環狀DNA分子，以超螺旋形式存在。細菌中普遍存在；宿主範圍較窄；獨立於染色體之外進行複製和遺傳；有多種機制維持其穩定的copy及精確分配給子代；複製轉錄或多或少依賴宿主編碼的酶與蛋白質；含有編碼對細菌宿主有利酶的基因（抗生素抗性、限制修飾、降解複雜化合物等）質粒的分類根據複製機理：嚴緊控制型：嚴格受到宿主細胞的控制，只含2-3個鬆弛控制型：生長繁殖不受宿主細胞的限制，幾十到幾百個質粒的複製子決定其copy複製子：一個遺傳單位，包括複製起點和相關調控元件。質粒複製子：質粒DNA中能自主複製並維持正常copy數的一段最小的核酸序列單位。基因工程最常用：pMB1/colE1質粒的不相容性利用同一複製系統的兩個質粒在複製和隨後向子細胞分配過程中彼此競爭，因而不能和平共處攜帶相同複製子屬於同一不相容組，不共存在同一細菌中2.細胞器基因組線粒體基因組： 閉環雙鏈超螺旋，動物的較小，植物的較大。葉綠體基因組： 閉環雙鏈超螺旋，100-200kb，基因無明顯成簇現象，rRNA基因多copy，與E.coli有同源序列，基因有內含子。PCR引物GC含量應該保持合理的GC含量。含有50％的G+C的20個堿基的寡核苷酸鏈的Tm值大概在56-62℃範圍內，這為有效退火提供足夠熱度。一對引物GC含量和Tm值應該協調。對於低於20個堿基的引物，可以根據Tm＝4×（G+C）+2（A+T）的經驗計算。