维生素的测定.ppt

（2）标准曲线的制备:本方法采用内标法定量。把高、低两个浓度的维生素A、γ-生育酚、a-生育酚、δ-生育酚及内标苯并芘液混合，（其内标苯并芘的浓度值相同）将二种浓度的混合标准进行色谱分析，结果见色谱图。以维生素峰面积与内标物峰面积之比为纵坐标，维生素的浓度(ug/mL）为横坐标绘制标准曲线。第23页，共58页，星期日，2025年，2月5日第24页，共58页，星期日，2025年，2月5日样品分析：取样品处理液20μL，用标准溶液同样的条件进行色谱分析，绘制色谱图。定性：根据保留时间定性定量：根据色谱图求出某种维生素的峰面积与内标物峰面积的比值，以此比值在标准曲线上查得待测维生素的含量。第25页，共58页，星期日，2025年，2月5日计算：式中：X—某种维生素的含量，mg／100g；p—由标准曲线上查到的某种维生素含量，μg/mL；V—样品浓缩后定容体积，mL；m—样品质量，g。第26页，共58页，星期日，2025年，2月5日说明及讨论（1）维生素极易被光破坏，实验操作应在微弱光线下进行，或使用棕色玻璃仪器。（2）乙醚为溶剂的萃取体系，易发生乳化现象。在提取、洗涤操作中，不要用力过猛，若发生乳化，可加几滴乙醇破乳。（3）本法是国家标准检验方法，适用于各种食物和饲料中维生素A和维生素E的同时测定。（4）本法不能将β-生育酚γ-生育酚分开，所以γ-生育酚的色谱峰中含有β-生育酚。第27页，共58页，星期日，2025年，2月5日（5）维生素的含量可用国际单位（IU）表示：1国际单位（IU）=0.3ug维生素A=1mg维生素E=0.025ug维生素D第28页，共58页，星期日，2025年，2月5日5.7.3维生素A的测定（三氯化锑比色法）原理：VA+三氯化锑→蓝色物质，于620nm测吸光度，与标准比较定量。?试剂：无水Na2SO4、乙酸酐：吸水乙醚：抽提乙醇、KOH：皂化反应三氯甲烷：溶剂三氯化锑-三氯甲烷：反应试剂酚酞：用于鉴别洗涤液中有无碱第29页，共58页，星期日，2025年，2月5日步骤：（1）预处理：皂化、提取、洗涤、浓缩（2）制备标准曲线：用VA标准液绘制，用CHCl3调零。注意在移入光路前，迅速加入三氯化锑，6秒内测定(3)样品测定：用样品溶液代替标准液溶液。???第30页，共58页，星期日，2025年，2月5日说明(1)萃取时,不要用力过猛,避免发生乳化。（2）氯仿中必须无水，因三氯化锑遇水会出现沉淀，干扰比色测定。（3）由于三氯化锑与VA所产生的兰色物质不稳定，注意在移入光路前，迅速加入三氯化锑，6秒内测定。（4）三氯化锑腐蚀性强，且遇水生成白色沉淀，实验用过的仪器要先用稀盐酸浸泡后再清洗。第31页，共58页，星期日，2025年，2月5日5.7.4、β-胡萝卜素的测定（HPLC法）试样中的β-胡萝卜素，用石油醚+丙酮混合液提取，经三氧化铝柱纯化，然后以高效液相色谱法测定，以保留时间定性，以峰高或峰面积定量。注意：浓缩提取液时，防止蒸干，避免胡萝卜素在空气中氧化或因高温、紫外线直射等破坏。第32页，共58页，星期日，2025年，2月5日5.7.5、维生素B1的测定——荧光法原理：硫胺素（VB1）在碱性铁化钾溶液中被氧化为嘧噻色素，在紫外线照射下，嘧噻色素发出荧光。在给定条件下，以及没有其他荧光物质干扰时，荧光强度与嘧噻色素成正比，即与溶液中硫胺素量成正比。试样在硫酸作用下,加热提取VB1.冷却后用淀粉酶在pH=4.5时处理使VB1分离如果样品中含杂质过多，应经离子交换剂处理，使硫胺素与杂质分离，然后以所得溶液做测定。测定步骤：提取→净化→氧化→测定加入淀粉酶的作用:使结合态VB1变为游离态VB1.第33页，共58页，星期日，2025年，2月5日5.7.6、维生素B2的测定——荧光法原理：试样在稀盐酸中水解、酶解，调整PH值，过滤除去蛋白质等物质；试样溶液经高锰酸钾氧化，除去干扰物，再经硅镁吸附剂的柱层析，提纯的核黄素在波长525nm下发生黄绿色荧光，在稀溶液中其荧光强度与核黄素的浓度成正比。再加入低亚硫酸钠，将VB2还原成无荧光的物质，然后再测定试液中残余荧光杂质的荧光，两者相差即为食品中核黄素所