电泳和色谱分离技术(应用).pptVIP

概述——过程特点色谱的分类3、按使用目的分类①分析用色谱②制备用色谱③流程用色谱第23页，共37页，星期日，2025年，2月5日概述——过程特点色谱分离过程基础理论保留值、分离度和柱效应（1）保留值保留值通常以保留时间及容量因子来表示。保留值是色谱过程的基本热力学参数之一。它也是色谱定性的基本依据。从进样开始到柱后出现样品的浓度极大值所需的时间为保留时间，与固定相和流动相的性质、柱温、流速、柱体积等因素有关。第24页，共37页，星期日，2025年，2月5日概述——过程特点色谱分离过程基础理论容量因子指在一定温度和压力下，组分在固定相和流动相之间达到平衡时的质量之比。它与柱尺寸及流速无关，而与溶质在两相间的分配性质、柱温及固定相和流动相之体积比有关。第25页，共37页，星期日，2025年，2月5日概述——过程特点色谱分离过程基础理论保留值、分离度和柱效应（1）分离度相邻色谱峰峰顶之间的距离除以两色谱峰的平均宽度。当R=1时，两色谱峰的分离程度可达94%；当R=1.5时，两个色谱峰已完全分离。第26页，共37页，星期日，2025年，2月5日制作者：黄德春制作者：黄德春制作者：黄德春制作者：黄德春制作者：黄德春制作者：黄德春制作者：黄德春《高等制药分离工程》制作者：黄德春制作者：黄德春制作者：黄德春制作者：黄德春制作者：黄德春制作者：黄德春制作者：黄德春《高等制药分离工程》制作者：黄德春制作者：黄德春制作者：黄德春制作者：黄德春制作者：黄德春制作者：黄德春制作者：黄德春《高等制药分离工程》制作者：黄德春制作者：黄德春制作者：黄德春制作者：黄德春制作者：黄德春制作者：黄德春制作者：黄德春《高等制药分离工程》制作者：黄德春制作者：黄德春制作者：黄德春制作者：黄德春制作者：黄德春制作者：黄德春制作者：黄德春《高等制药分离工程》制作者：黄德春制作者：黄德春制作者：黄德春制作者：黄德春制作者：黄德春制作者：黄德春制作者：黄德春《高等制药分离工程》制作者：黄德春制作者：黄德春制作者：黄德春制作者：黄德春制作者：黄德春制作者：黄德春制作者：黄德春《高等制药分离工程》制作者：黄德春制作者：黄德春制作者：黄德春制作者：黄德春制作者：黄德春制作者：黄德春制作者：黄德春《高等制药分离工程》关于电泳和色谱分离技术(应用)第1页，共37页，星期日，2025年，2月5日概述——过程特点第一节．电泳基本概念1、电泳是指带电荷的供试品(蛋白质、核甘酸等)在惰性支持介质中(如纸、醋酸纤维素、琼脂糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶等)在电场作用下向其对应的电极方向按各自的速度进行泳动，使组分分离成狭窄区带，用适宜的检测方法记录其电泳区带图谱或计算其百分含量的方法。电泳技术是实验室中分析、鉴定和分离技术之一。第2页，共37页，星期日，2025年，2月5日概述——过程特点第一节．电泳基本概念2、电泳分类：第3页，共37页，星期日，2025年，2月5日概述——过程特点第二节电泳分离基本原理带电粒子在电场中产生定向迁移，引起其迁移所受力（F)与电场强度(E)和粒子所带净电荷（Z)成正比:粒子在电场中所受力与溶液黏度、分子半径、及稳态下移动速度有关第4页，共37页，星期日，2025年，2月5日各种不同分子量的蛋白质在电场内迁移速率与它的净电荷数成正比，而与其分子半径及溶液黏度成反比。实验证明，蛋白质的电泳迁移速率与蛋白质分子量的对数成线性关系第5页，共37页，星期日，2025年，2月5日根据此性质，可对具有相同电荷，不同分子量的蛋白质进行分离。第6页，共37页，星期日，2025年，2月5日电泳技术分类影响电泳迁移率的因素①电场强度。电场强度是指单位长度(cm)的电位降．也称电势梯度。根据电场强度不同，将电泳分为常压电泳(2-10V/cm)和高压电泳(20-200V/cm)。电场强度高，带电质点的迁移率加速，因此省时，但会产生大量热量。第7页，共37页，星期日，2025年，2月5日②溶液的pH值。溶液的pH值决定被分离物质的解离程度和质点的带电性质及所带净电荷量。对于带有两性基团的电解质，溶液存在一pH值，此时，溶液所带正负电荷相等，即分子的净电荷等于零，此时，在电场中不再移动，这一pH值称为电解质的等电点（isoelectricpoint,PI)。若溶液pH值