《病原微生物学》课件.pptVIP

*************************************细菌的生理生化试验生理生化试验是鉴定细菌种类的重要手段，基于不同菌种代谢能力的差异。常用试验包括催化酶试验（检测过氧化氢酶）、氧化酶试验（鉴别铜绿假单胞菌等）、IMViC试验（肠杆菌科鉴定）、糖发酵试验（检测糖代谢方式）、尿素酶试验（幽门螺杆菌特征）等。现代临床实验室常采用商业化生化鉴定系统，如API系统、VITEK自动化系统等，这些系统集成多种生化反应，结合计算机数据库分析，可快速准确地鉴定临床分离菌株。生化鉴定结果对指导临床用药具有重要意义，是细菌学检验的基础内容。血清学诊断方法抗原检测直接检测患者样本中的病原体抗原，适用于病原体数量较多的急性感染。方法包括酶联免疫吸附试验(ELISA)、胶体金免疫层析和免疫荧光技术等。这些方法操作简便，结果快速，是临床常用的快速诊断手段。抗体检测检测患者血清中针对特定病原体的抗体，常需要检测IgM（急性感染）和IgG（既往感染或免疫状态）。方法包括ELISA、化学发光免疫分析、间接免疫荧光等。配对血清抗体滴度变化（四倍以上）具有诊断意义。凝集反应基于抗原抗体结合形成可见凝集物的原理。包括直接凝集（如威达试验用于伤寒诊断）、间接凝集（如乳胶凝集）和血凝抑制试验（如流感病毒诊断）。这些方法设备需求低，适合基层医疗机构使用。沉淀反应基于可溶性抗原与抗体结合形成沉淀物的原理。包括免疫扩散（如放射状免疫扩散测定免疫球蛋白含量）和免疫电泳（如蛋白电泳结合免疫沉淀）。这些方法多用于特定蛋白质抗原的定性和定量分析。分子生物学诊断方法1聚合酶链反应(PCR)扩增特定DNA片段，高灵敏度和特异性实时荧光PCR边扩增边检测，可定量分析基因芯片技术同时检测多个病原体或耐药基因4基因测序技术直接分析核酸序列，提供最详细信息分子生物学技术通过检测病原体特异性核酸序列进行诊断，具有高灵敏度、高特异性和快速等优势。这些方法对于难培养、生长缓慢或危险性高的病原体尤为重要。核酸扩增技术如PCR可在几小时内完成检测，实时荧光PCR还可进行定量分析，评估病原体载量，对指导治疗和预后判断具有重要价值。现代分子检测技术发展迅速，多重PCR可同时检测多种病原体；等温扩增技术如环介导等温扩增(LAMP)简化了设备需求；基因芯片和高通量测序技术则能提供更全面的病原体信息。这些技术正逐渐成为病原体检测的主流方法，特别是在新发传染病和疑难感染性疾病的诊断中发挥关键作用。病毒的分离和培养样本收集根据病毒类型选择适当的临床样本，如呼吸道分泌物、粪便、血液或组织。样本必须尽早采集（通常在发病后3-5天内），并在适当保存条件下迅速送检。运输介质通常含有抗生素以抑制细菌生长，并维持病毒活性。培养系统选择根据目标病毒选择适当培养系统：原代细胞（如人胚肾细胞）最接近自然宿主但标准化难；连续传代细胞系（如HeLa、Vero细胞）使用方便但宿主范围有限；鸡胚尤其适用于流感病毒培养；实验动物则用于某些特殊病毒研究。接种和培养经处理的样本接种到选定的培养系统中，在适宜温度（通常33-37℃）培养。病毒感染后，需定期观察细胞病变效应(CPE)，如细胞融合、变圆、脱落等形态学改变。不同病毒产生特征性CPE，可初步判断病毒类型。病毒鉴定分离的病毒需通过血清学方法（如中和试验、免疫荧光）或分子生物学方法（如RT-PCR、测序）进行鉴定。对于某些病毒，电子显微镜观察形态结构也有辅助诊断价值。完整的病毒分离和鉴定对流行病学监测和疫苗研发尤为重要。病毒的检测方法直接检测法电子显微镜观察：直接观察病毒形态免疫电镜技术：结合抗体提高特异性免疫荧光技术：检测感染细胞中的病毒抗原免疫组织化学：在组织切片中检测病毒抗原免疫学检测酶联免疫吸附试验(ELISA)：检测病毒抗原或抗体免疫层析技术：快速检测试剂的基本原理化学发光免疫分析：高灵敏度抗原抗体检测放射免疫分析：用放射性标记提高敏感性分子生物学检测聚合酶链反应(PCR)：DNA病毒的常用检测方法逆转录PCR(RT-PCR)：RNA病毒的检测方法实时定量PCR：定量评估病毒载量分子杂交：检测特定病毒核酸序列真菌的检测方法直接显微镜检查将临床样本直接在显微镜下观察，可使用湿片法或经特殊染色处理。常用染色方法包括墨汁染色（荚膜）、KOH制备（溶解角质细胞）、乳酚棉蓝染色（突出真菌结构）和高铁苏木精染色（组织切片中的真菌）。显微镜检查可快速获得初步诊断信息。培养分离使用特殊培养基如沙氏葡萄糖琼脂(SDA)培养基分离真菌。根据菌落形态、颜色、生长速度和显微形态特征进行初步鉴定。某些致病真菌如新