食品安全标准 婴幼儿食品和乳品中胆碱的测定.docx

中华人民共和国国家标准

犌B5413．20—2022

食品安全国家标准

婴幼儿食品和乳品中胆碱的测定

2022-06-30发布

2022-12-30实施

中华人民共和国国家卫生健康委员会国家市场监督管理总局

发布

Ⅰ

犌B5413．20—2022

前言

本标准代替GB5413．20—2013《食品安全国家标准婴幼儿食品和乳品中胆碱的测定》。本标准与GB5413．20—2013相比，主要变化如下：

—删除了第二法雷氏盐分光光度法，增加了离子色谱法作为第二法；

—增加了液相色谱-串联质谱法作为第三法。

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犌B5413．20—2022

食品安全国家标准

婴幼儿食品和乳品中胆碱的测定

1范围

本标准规定了婴幼儿食品和乳品中胆碱的测定方法。

本标准适用于婴幼儿食品和乳品中胆碱的测定。

第一法酶比色法

2原理

试样经酸水解，再经酶作用后与显色剂反应生成有色物质，在一定浓度范围内，其颜色的深浅与胆碱含量成正比，外标法定量。

3试剂和材料

除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB／T6682规定的三级水。

3．1试剂

3．1．1三羟甲基氨基甲烷[(CH2OH)3CNH2]。

3．1．2苯酚(C6H5OH)。

3．1．3浓盐酸(HCl)。

3．1．4氢氧化钠(NaOH)。

3．1．5胆碱氧化酶：≥10U／mg，置于－20℃保存。

3．1．6过氧化物酶：≥250U／mg，置于2℃~8℃保存。

3．1．74-氨基安替比林(C11H13N3O)。

3．1．8磷脂酶D：≥60U／mg，置于－20℃保存。

3．2试剂配制

3．2．1盐酸溶液(1mol／L)：量取85mL浓盐酸注入约900mL水中，稀释至1000mL。

3．2．2盐酸溶液(3mol／L)：量取250mL浓盐酸注入约600mL水中，稀释至1000mL。

3．2．3三羟甲基氨基甲烷缓冲溶液(Tris)(0．05mol／L)：准确称取6．057g三羟甲基氨基甲烷溶于500mL水中，用盐酸溶液(1mol／L)调pH至8．0±0．2，再用水定容至1000mL。此溶液在4℃冰箱中可保存1个月。

3．2．4显色剂：取120U的胆碱氧化酶、280U的过氧化物酶、100U的磷脂酶D、15mg4-氨基安替比林和50mg苯酚置于100mL的容量瓶中，用0．05mol／LTris缓冲溶液溶解并定容。临用现配。3．2．5氢氧化钠溶液(500g／L)：称取500g氢氧化钠，溶于水并稀释至1000mL，采用塑料容器储存。

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3．3标准品

胆碱酒石酸氢盐标准品(C9H19NO7，相对分子质量：253．25，CAS号：87-67-2)：纯度≥99％，或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。

3．4标准溶液配制

3．4．1胆碱(以胆碱氢氧化物计，相对分子质量121．18)标准储备溶液(2500mg／L)：准确称取在102℃±2℃烘至恒重的胆碱酒石酸氢盐522．5mg，用水溶解并转移至100mL容量瓶中定容，混匀。4℃以下避光保存，有效期3个月。

3．4．2胆碱标准工作溶液(250mg／L)：吸取10．0mL胆碱标准储备溶液于100mL容量瓶中，用水定容，混匀，4℃以下避光保存，有效期1个月。

3．5材料

3．5．10．45μm水性滤膜针头滤器。

3．5．2注射器：5mL或相当者。

4仪器和设备

4．1分析天平：感量分别为0．1mg和0．001g。

4．2恒温水浴装置：温度可控制在70℃±2℃和37℃±2℃。

4．3pH计：精度0．01。

4．4分光光度计。

5分析步骤

5．1样品前处理

5．1．1样品预处理

准确称取20g(精确至0．001g)混合均匀的液态试样于100mL锥形瓶中，加入3mol／L的盐酸溶液10mL，加塞混匀。

准确称取5g(精确至0．001g)混合均匀的半固态或固态试样于1