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中华人民共和国国家标准
GB5009O296—2023
食品安全国家标准
食品中维生素D的测定
2023-09-06发布
2024-03-06实施
中华人民共和国国家卫生健康委员会国家市场监督管理总局
发布
I
GB5009.296—2023
前言
本标准代替GB5009.82—2016《食品安全国家标准食品中维生素A、D、E的测定》中第三法“食品中维生素D的测定液相色谱-串联质谱法”和第四法“食品中维生素D的测定高效液相色谱法”。
本标准与GB5009.82—2016相比，主要变化如下：
—标准名称修改为《食品安全国家标准食品中维生素D的测定》；
—增加了在线柱切换-反相液相色谱法；
—增加了样品预制备方法；
—修改了液相色谱-串联质谱法的线性范围和仪器参考条件；
—修改了附录中标准校正溶液的配制方法。
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GB5009.296—2023
食品安全国家标准
食品中维生素D的测定
1范围
本标准规定了食品中维生素D的测定方法。
第一法正相色谱净化-反相液相色谱法适用于添加了麦角钙化醇或胆钙化醇的食品中维生素D2和维生素D3的测定。
第二法在线柱切换-反相液相色谱法适用于食品中维生素D2和维生素D3的测定。第三法液相色谱-串联质谱法适用于食品中维生素D2和维生素D3的测定。
第一法正相色谱净化-反相液相色谱法
2原理
试样经氢氧化钾乙醇溶液皂化，液液苹取净化、浓缩后，用正相高效液相色谱仪通过硅胶柱将维生素D与其他杂质分离，将收集的馏分浓缩后，再经反相色谱柱分离维生素D2与维生素D3，紫外检测器检测，内标法(或外标法)定量。当试样中不含维生素D2时，可用维生素D2作内标测定维生素D3；当试样中不含维生素D3时，可用维生素D3作内标测定维生素D2。否则，用外标法测定。
3试剂和材料
除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。
3.1试剂
3.1.13.1.23.1.33.1.43.1.53.1.63.1.73.1.83.1.93.1.10
3.1.11
无水乙醇(C2H6O):色谱纯。
抗坏血酸(C6H8O6)。
2，6-二叔丁基对甲吩(C15H24O):简称BHT。
a-淀粉览(CAS号:9000-90-2，中温淀粉览，来源于芽抱杆菌属):览活力自1.5U/mg。氢氧化钾(KOH)。
正己烧(C6H14)。
甲醇(CH4O):色谱纯。
无水硫酸钠(Na2SO4)。
环己烧(C6H12)。
异丙醇(C3H8O)。
石油酷:沸程为30C~60C。
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GB5009.296—2023
3.2试剂配制
3.2.1氢氧化钾溶液(50%,质量分数):称取50g氢氧化钾,溶于50g水中,冷却后储存于聚乙僻瓶中。
3.2.2BHT-乙醇溶液(0.2g/100mL):称取1.0gBHT,溶于500mL无水乙醇中,临用前配制。
3.2.3异丙醇-环己烧-正己烧溶液(2十125十125):将异丙醇、环己烧和正己烧按2：125：125的体积比混合均匀,超声脱气。
3.2.4甲醇-水溶液(19十1):将甲醇和水按19：1的体积比混合均匀,超声脱气。
3.3标准品
3.3.1维生素D2标准品:麦角钙化醇(C28H44O,CAS号:50-14-6),纯度自98%,或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。
3.3.2维生素D3标准品:胆钙化醇(C27H44O,CAS号:67-97-0),纯度自98%,或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。
3.4标准溶液配制
3.4.1维生素D2标准储备溶液(1000mg/L):准确称取50mg(精确至0.1mg)维生素D2标准品于小烧杯中,用无水乙醇溶解并转移至50mL容量瓶中,定容至刻度,混匀。按附录A进行储备液浓度校正,将该储备溶液装至棕色试剂瓶中,密封后在—18C下避光保存,保存期6个月。
3.4.2维生素D3标准储备溶液(1000mg/L):准确称取50mg(精确至0.1mg)维生素D3标准品于小烧杯中,用无水乙醇溶解并转移至50mL容量瓶中,
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