抗菌药物筛选的实验方法与技术教案.pptVIP

**综合化学实验-化学生物学专题实验指导教师：马林，蔡小玲化学与化学工程学院抗菌药物筛选的实验方法与技术一个新的化合物或分离提取有效成分是否有抗菌作用，需要药理实验来证实，首先采用体外实验方法，观察试验物对细菌有无杀灭作用或抑制作用，体外实验的重要性在于方法简便，用药量少，短时间内能判断药物抗菌的广度和强度，为深入体外实验和体内药效研究提供数据。体外实验是筛选抗菌药物或测试新药抗菌性能的重要环节。药物对细菌代谢的影响、可以使细胞呼吸量减低，或酶系统受到抑制等，因而出现细菌不生长或部分抑制，可借以判断药物对细菌有无抗菌作用，或抗菌范围。体外实验是细菌与药物直接接触，没有机体诸因素参与，故体外和体内实验的结果不一定完全一致，需两方面综合分析进行评价。1，手提式高压蒸汽灭菌锅；12，超净工作台；23，各种移液器；34，细菌恒温培养箱；45，微生物培养摇床；56，酶标仪；61，掌握培养基的制备、高压蒸气灭菌、菌种培养、接种等微生物培养技术；72，掌握化合物抗菌、抑菌活性筛选技术；83，掌握微孔板法、抑菌圈法抗菌最小浓度测试等基本操作技术。94，学会使用各种仪器设备。10实验中使用的仪器设备：一、实验目的二、微生物培养基的配制、灭菌与培养培养基是指利用人工方法将适合微生物生长繁殖成积累代谢产物的各种营养物质混合配制而成的营养基质。主要用于微生物的分离、培养、鉴定以及菌种保藏等方面。培养基一般应含有微生物生长繁殖所需要的碳源、氮源、能源、无机盐、生长因子和水等营养成分。此外，为了满有微生物生长繁殖或积累代谢产物的要求，还必须控制培养基的pH。培养基可分为天然培养基、合成培养基和半合成培养基。按培养基的物理状态，可将培养基分为固体培养基、半固体培养基和液体培养基。固体培养基是指在液体培养基中加入一定量的凝固剂(常加1.5%-2%的琼脂)经融化冷凝而成。半固体培养这是指在液体培养基中加入0.8％-1％左右的琼脂，经融化冷凝而成。液体培养基是指培养基中不加凝固剂琼脂，培养基呈液体状态。正确掌握培养基的配制方法是从事微生物学实验工作的重要基础。由于微生物种类及代谢类型的多样性，因而用于培养微生物培养基的种类也很多，它们的配方及配制方法虽各有差异。但一般培养基的配制程序却大致相同，例如器皿的准备，培养基的配制与分装，棉塞的制作，培养基的灭菌，斜面与平板的制作以及接菌等基本环节大致相同。（一）基本原理（二）实验过程1，液体及固体培养基的配制过程一般培养基的组成牛肉膏0.5g蛋白胨1gNaCl0.5g琼脂1.5-2g水100mlpH7.2液体培养基不加琼脂即可。(1)称量及溶化分别称取蛋白胨、NaCl、牛肉膏置于另一小烧杯中，进行称量。然后加入少量蒸馏水于小烧杯中，加热融化。(2)调pH待溶液冷至室温时，用0.1mol/LNaOH溶液调pH至7.2。(3)定容将溶液倒入量筒中，补充水量至所需体积。(4)固体培养基加入所需量的琼脂，加热融化，补充失水。(5)分装、加塞、包扎。(6)高压蒸汽灭菌100Pa灭菌20min2，培养基的分装液体培养基装入试管培养基的量视试管大小及需要而定，若所用试管大小为15×150mm时，液体培养基可分装至试管高度1/4左右为宜（约5ml）；分装团体培养基时，在琼脂完全融化后，应趁热分装于试管中分装量为管高1/5(约4-5ml)。3，棉塞的制作及试管、锥形瓶的包扎试管棉塞的制作制棉塞时，应选用大小、厚薄适中的普通棉花一快，铺展于左手拇指和食指如成的圆孔上，用右手食指将棉花从中央压入团孔中制成棉塞，然后直接压入试管或锥形瓶口。将装好培养基并塞好棉塞或盖好管帽的试管捆成—捆，外面包上一层牛皮纸。用铅笔注明培养基名称及配制日期。灭菌待用。4，培养基的灭菌高压蒸汽灭菌是微生物学实验、发酵工业生产、以及外科手术器械等方面最常用的一种灭菌方法。（1）打开灭菌锅盖，加适量水；（2）将待灭菌物品放入灭菌桶内。（3）将盖上的软管插入灭菌桶的槽内，加盖，上下螺栓口对齐，均匀旋紧螺栓，使锅密闭。（4）打开放汽阀，加热，自锅内开始产生蒸汽后再关紧放汽阀，待压力逐渐上升至所需温度时，控制热源，维持所需压力和温度，并开始计时20min后停止加热。（5）待压力降至接近0时，慢慢打开放汽阀(排汽口)，开盖，立即取出灭菌物品。5，斜面和平板的制作将巳灭菌装有琼脂培养基的试管，趁热置于木棒上，使成适当斜度，凝固后即成斜面(图1-3)斜面长度不