血清学反应试验.ppt

乳胶凝集试验乳胶凝集试验

以乳胶颗粒作为载体的间接凝集试验，称为乳胶凝集试验。该试验既可检测相应的抗体也可鉴定未知的抗原，而且方法简便、快速，在临床诊断中广泛应用于伪狂犬病、流行性乙型脑炎、钩端螺旋体病、猪细小病毒病、猪传染性萎缩性鼻炎、禽衣原体病、山羊传染性胸膜肺炎、囊虫病等的诊断。抗原抗体反应类型-----间接凝集反应第30页，共75页，星期日，2025年，2月5日协同凝集试验协同凝集试验

葡萄球菌A蛋白是大多数金黄色葡萄球菌的特异性表面抗原，能与多种哺乳动物血清中的IgG分子的Fc片段相结合，结合后的IgG仍保持其抗体活性。当这种覆盖着特异性抗体的葡萄球菌与相应抗原结合时，可以相互连接引起协同凝集反应，在玻板上数分钟内即可判定结果(加图图八)。目前已广泛应用于快速鉴定细菌、霉形体和病毒等抗原抗体反应类型-----间接凝集反应第31页，共75页，星期日，2025年，2月5日碳粉凝集试验炭粉凝集试验

以极细的活性炭粉作为载体的间接凝集试验，称为炭粉凝集试验。反应在玻板上或塑料反应盘进行，数分钟后即可判定结果。通常是用抗体致敏炭粉颗粒制成炭素血清，用以检测抗原，如马流产沙门氏菌；也可用抗原致敏炭粉，用以检测抗体，如腺病毒感染、沙门氏菌病、大肠杆菌病、囊虫病等的诊断。抗原抗体反应类型-----间接凝集反应第32页，共75页，星期日，2025年，2月5日抗原抗体反应类型-----沉淀反应（precipitationreaction)可溶性抗原（如细菌的外毒素、内毒素、菌体裂解液、病毒的可溶性抗原、血清、组织浸出液等）与相应的抗体结合，在适量电介质存在下，形成肉眼可见的细微的白色沉淀。第33页，共75页，星期日，2025年，2月5日抗原抗体反应类型-----沉淀反应（precipitationreaction)可溶性抗原+相应抗体肉眼可见的沉淀第34页，共75页，星期日，2025年，2月5日沉淀反应环状沉淀反应絮状沉淀反应抗原沉淀环抗血清抗原抗血清混合抗原抗体反应类型-----沉淀反应常用于毒素、类毒素和抗毒素的定量测定主要用于抗原的定性试验，如炭疽病的诊断（Ascoli氏试验）、链球菌的血清型鉴定和血迹鉴定等第35页，共75页，星期日，2025年，2月5日沉淀反应沉淀反应--------凝胶扩散试验：1%琼脂凝胶的孔径约85毫微米，可允许各种抗原抗体自由扩散。由近及远形成浓度梯度。单向单扩散单向双扩散抗原抗血清+琼脂抗原琼脂抗血清+琼脂第36页，共75页，星期日，2025年，2月5日沉淀反应沉淀反应--------琼脂扩散试验：双向单扩散双向双扩散抗血清+琼脂抗原沉淀线孔径3mm抗原待检血清标准阳性抗血清第37页，共75页，星期日，2025年，2月5日单向免疫扩散第38页，共75页，星期日，2025年，2月5日A：Ag、Ab浓度及扩散率近似；B：Ag、Ab浓度近似，扩散率Ag＞Ab；C：Ag、Ab浓度近似，扩散率Ag＜Ab；D：扩散率近似，浓度Ag＞Ab；E：浓度Ag＞Ab，扩散率Ag＞Ab；F：浓度Ag＜Ab，扩散率Ag＜Ab沉淀线形状、位置与抗原抗体扩散率及浓度的关系双向琼脂扩散第39页，共75页，星期日，2025年，2月5日(1)沉淀线吻合：待检抗原与标准抗原完全相同。(2)沉淀线相切：待检抗原中含有与标准抗原相同的抗原，还含有另外的抗原与抗血清相对应。(3)沉淀线相交：待检抗原有与抗血清对应的抗原，但和标准抗原不同。(4)沉淀线部分吻合：待测抗原和标准抗原性质相同，但含量较低。A1：待检抗原；A2：标准抗原双响琼脂扩散第40页，共75页，星期日，2025年，2月5日抗体效价滴定用梅花型孔，中间放抗原，周围孔放下不同稀释度的相应抗体，以出现沉淀线的最高稀释倍数为该抗体的效价。第41页，共75页，星期日，2025年，2月5日对流免疫电泳在pH为8.6的琼脂凝胶板上打孔，两孔为一组，孔径3mm，抗原、抗体孔间距为4～5mm。将抗原加入负极端孔内，抗体加入正极端孔内，用2～4mA/cm电流电泳1h左右，观察结果，在两孔之间出现沉淀带的为阳性反应。第42页，共75页，星期日，2025年，2月5日在pH8.6的琼脂凝胶中，抗体球蛋白因等电点高，只带有微弱的负电荷，而且分子又较大，因此电泳力小，小于电渗力，泳向负极；而一般抗原蛋白质常带较强的负电荷，分子较小，电泳力大，大于电渗力，泳向正极，电泳时抗原放负极侧，抗