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手工制备冰冻解冻红细胞方法与操作要点

【摘要】目的提高标准化操作冰冻红细胞制备程序，保证临床供血。方法

利用不同条件制备成品冰冻红细胞，测定回收率、血细胞残留量、甘油残留量、

溶血率、上清游离血红蛋白。结果在有效条件下，制备成品冰冻解冻红细胞，

其红细胞回收率、溶血率、上清游离血红蛋白及体外溶血试验均无显著性差异。

结论掌握制备冰冻解冻红细胞操作要点，可以提高冰冻解冻红细胞质量。

【关键词】冰冻红细胞；离心力；甘油；上清游离血红蛋白

随着成分输血的开展，冰冻解冻去甘油红细胞是用甘油作为冷冻剂低温冰冻

保存红细胞制剂的一种方法，是在紧急情况下，能够及时抢救Rh阴性的患者，

近年来临床应用受到重视，它是一种低温保存红细胞很有效的方法[1]。早在60

年代，就已建立了冰冻红细胞低温保存技术，因为温度较低的状态下，红细胞

谢会逐渐降低，或者细胞代谢活动停止。这样红细胞能量的消耗也降低，红细胞

的一些代谢产物也会随之降低，使红细胞处在休眠状态。冷冻血是其它制剂所不

能替代的制剂，长达十年的保存期[2]。使Rh阴性血的来源得到保障。为患者抢

救争取了保贵时间。目前红细胞冷冻保护剂应用的是复方甘油溶液。由于甘油渗

透压较高，人体输入过量甘油会造成细胞溶血，给患者造成极大损害。所以为了

更好提高冰冻解冻去甘油红细胞的质量，作者在制备时采用手洗梯度洗涤法来制

备，在红细胞制备、保存、解冻洗涤过程中积累一些经验，现和大家分享一下。

1材料与方法

1.1试剂与耗材57%复方甘油溶液、9%氯化钠溶液、三珠冷冻袋、无菌四

联袋（北京博德桑特输采血器材科技开发中心）、羟乙基淀粉溶液（济南三九益

民制药公司）、0.9%生理盐水（吉林康乃尔公司）、振荡器（HY-4金坛市）、无菌

接驳机（SC-203A泰尔）、恒温水浴箱（余姚市东方电工仪器厂）、-80℃速冻冰

箱（三洋）、离心机（贺利氏6000I）。

1.2冰冻红细胞制备方法加入甘油，将保存期6d内的全血或红细胞悬液离

心，2200r/min，25min，去除上清后，将红细胞用无菌接驳机与三珠袋相接，

并转移至三珠袋中加甘油，动作一定要轻柔，避免对红细胞造成人为损伤。200ml

红细胞需加甘油160ml，加甘油滴速必须控制，先慢后快，前5min甘油滴速为

40滴/min左右，5min后甘油滴速可以控制为80滴/min，20min滴加完毕。振

荡器的频率为60次/min，振幅为5c。甘油化的红细胞尽量减少人为移动，需

要在室温静止30min，30min后送-80℃速冻冰箱速冻待用，保存一个月以上方

可应用。

1.3洗脱甘油取出保存在-80℃速冻冰箱内的冰冻红细胞，在37～42℃水浴

箱内融化，融化时间为每袋4～5min，水浴箱内的水要没过血袋，融化完成，取

出在室温下静止5min，用无菌接驳机连接空袋，在4℃条件下，2300r/min离心

8min后去除上清，然后用无菌接驳机与输血器下端连接，输血器上端连接

9%NaC溶液（80m），滴速先慢后快，前2min滴速为20～30滴，2min后滴

速调至50～60滴/min，7min加完。静止5min后，加入羟乙基淀粉溶液100m，

滴速控制在40～50滴/min，静止5min后，再加入0.9%氯化钠溶液50m后，

开始离心，2300转8min去除上清后，加入0.9%氯化钠溶液150m，匀速加入，

60～80滴/min。以上在往冰冻红细胞加入溶液时均需在振荡下完成，振荡器的频

率为60次/min，振幅为5cm。连续洗涤三次，制备成冰冻解冻去甘油红细胞。

1.4在制备过程中加甘油后不同放置时间和洗脱时不同离心力对产品质量

有较大影响，按照这两项条件不同将制备的产品分A组和B组。

1.5质量控制标准上清血红蛋白不超过1g/L；残余甘油含量在10g/L；红

细胞回收率＞80%；体外溶血实验≤50%[3]。

1.6统法学方法数据用均数±标准差（x±s）表示，组间比较采用t检验。

2结果

2.1甘油化时红细胞加甘油后不同放置时间，A组15min，B组30min，检

测甘油残留量，A组甘油残留量：7.85±0.65（