综合实验化能异养微生物的分离与纯化(实验要求).docx

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化能异养微生物的分别与纯化(综合)

安排说明：本试验要求以试验小组为单位完成。第8周起，各小组应当下载相关资料，做好预习〔器材申报与领用〕。

集中试验时间：11周~13周。

周：提交试验材料要求清单一式两份，一份上交，并依据清单领取器材。

周：开展试验，试验完成后整理试验结果，撰写试验报告。

周：完成整个试验器材归还。

本次试验考评占试验总成绩的20%！考评内容包括试验纪律、操作技术、试验报告。试验结果组内共用，试验报告自己写。

留意：期末试验课成绩=试验考试〔卷面成绩、操作各占50%〕50%+试验报告20%+综合、

设计试验成绩20%+寻常成绩10%〕

第一局部：试验原理及目的要求

[目的要求]

把握细菌、放线菌、酵母菌和霉菌稀释分别、划线分别等技术。

学习从样品中分别、纯化出所需菌株。

学习并把握平板倾注法和斜面接种技术，了解培育细菌、放线菌、酵母菌及霉菌四大类微生物的培育条件和培育时间。

学习平板菌落计数法。[根本原理]

土壤是微生物生活的大本营，是查找和觉察有重要应用潜力的微生物的主要菌源。不同

土样中各类微生物数量不同，一般土壤中细菌数量最多，其次为放线菌和霉菌。一般在较干燥，偏碱性、有机质丰富的土壤中放线菌数量较多；酵母菌在一般土壤中的数量较少，而在水果表皮、葡萄园、果园土中数量多些。本次试验从土壤中分别细菌、放线菌和霉菌；白面曲(发面用的引子)或酒曲或果园土中分别酵母菌。

为了分别和确保获得某种微生物的单菌落，首先要考虑制备不同稀释度的菌悬液。各类菌的稀释度因菌源、采集样品时的季节、气温等条件而异。

其次，应考虑各类微生物的不同特性，避开样品中各类微生物的相互干扰，通常需要使用不同的培育基，进展富集和选择培育。如细菌或放线菌在中性或微碱性环境较多．但细菌比放线菌生长快，分别放线菌时，一般在制备土壤稀释液时添加10%酚或在分别培养基中加相应的抗生素以抑制细菌和霉菌(如加链霉素25-50μg/mL以抑制细菌；添加制霉菌素50μg／mL或多菌灵30μg／mL以抑制霉菌)；酵母菌和霉菌都喜酸性环境，一般酵母菌只能以糖为碳源，不能直接利用淀粉，酵母菌在pH5时生长极快。细菌生长适宜的酸碱度为pH7，所以分别酵母菌时只要选择好适宜的培育基和pH，可降低细菌增殖率，霉菌生长慢，也不干扰酵母菌分别。假设分别霉菌，需降低细菌增殖率，一般培育基临用前须添加灭过菌的乳酸或链霉素。为了防止菌丝集中干扰菌落计数，分别霉菌时常在培育基中参加化学抑制剂。

要想获得某种微生物的纯培育，还需供给有利于该微生物生长生殖的最适培育基及培育条件。四大类微生物的分别培育基、培育温度、培育时间见表1。

表1四大类微生物的分别条件

样品来源

分别对象

稀释度

培育基名称

培育温度〔℃〕

培育时间/d

土样

细菌

10-5，10-6，10-7

牛肉膏蛋白胨

30~36

1~2

土样

放线菌

10-3，10-4，10-5

高氏1号

28

5~7

土样

霉菌

10-2，10-3，10-4

马丁氏培育基

28~30

3~5

面曲或土样

酵母菌

10-4，10-5，10-5

豆芽汁培育基

28~30

2~3

细菌分别平板

细菌单菌落

牛肉膏蛋白胨

30~37

1~2

注：本试验的目标在于两项核心试验操作技能〔按美国微生物学会核心课程试验操作技能第3条〕：1〕无菌操作技术——包括灭菌技术及保持相关器具的无菌状态；无菌操作技术；获得微生物样本；

2〕梯度稀释技术估算微生物的数目——正确选择和使用移液管和移液装置；正确涂布样本以准确计数；估量所需要稀释的倍数；依据平板计数值推想出起始样本的CFU或PFU。

其次局部：综合性试验——化能异养微生物的分别纯化〔自主试验设计与要求〕

一、分别四大类微生物〔细菌、放线菌、酵母、霉菌，〕要求每类型微生物各分别到2株菌，纯化后以斜面〔8支〕的形式交验；计算所采集土壤中的细菌含量〔CFU，要求交验计数所用的12块平板〕。

二、技术达标

培育基的配制：依据不同微生物的养分需要特点，配制相应的培育基，并进展培育基的验证。

把握梯度稀释法、划线法根本技术，其中划线法要求每人独立完成一份。

对所分别的菌株其菌落特征的表述〔列表〕。

小组的治理与合作。三、试验结果与汇报

综合报告：全组撰写一份综合报告。含预方案〔主要是器材打算、时间安排〕，执行记录，结论以及综合分析。可按需要自行设计表格，标准执行、标准记录。

报告的写作，请严格依据我院报告的格式要求，并参考网络课程中“试验报告互评的评分要

求”中的相关要求执行。

个人试验报告：每人一份试验报告，重点报告试验现象、观看思考，结果分析，综合体会等，不涉及方案及试验原理、步骤等的记录。

3试验汇报，以试验小组为单位，制作