转基因动物技术原理与应用.pptVIP

利用小鼠动物模型

研究基因表达与病理发育;转基因动物技术原理与应用;第一局部;什么是转基因？;动物转基因的重要性;转基因技术研究历史;常见转基因技术;真核基因结构与调节;基因结构图示;基因转录复合体;转基因载体构建;启动子的类型和选取;表达基因〔cDNA〕的类别;其它转基因载体构件选取;基因A启动子;转基因动物〔Founders〕鉴定;小鼠生物学根底及转基因优越性;产生转基因鼠标准条件和要求;转基因小鼠具体操作过程;转基因鼠建立时间表;供体受精卵收集，每次100－200个

供体受精卵细胞核DNA显微注射浓度:2-5ng/ul

受精卵回移代孕母鼠:每只移植20-30个左右双细胞卵

PCR或Southern筛选转基因鼠(founders),15-50%,随机插入，拷贝数1-≥100

第一代下传〔F1)0-100%，有卵裂后插入或两个以上的插入位点

第二带下传，蒙德尔遗传，50％

表达功能分析：从E10到5个月;转基因常见问题;转基因动物原理及应用;第二局部：基因定位修饰;基因定位修饰重要性;小鼠早期发育示意图;干细胞特性;GeneTrap(基因捕获〕;基因定位修饰载体类型;NEO;;Genetargetinginembryonicstemcellshasbecometheprincipaltechnologyformanipulationofthemousegenome,offeringunrivalledaccuracyinalleledesignandaccesstoconditionalmutagenesis.Tobringtheseadvantagestothewiderresearchcommunity,large-scalemouseknockoutprogrammesareproducingapermanentresourceoftargeted

mutationsinallprotein-codinggenes.Herewereporttheestablishmentofahigh-throughputgene-targetingpipelineforthegenerationofreporter-tagged,conditionalalleles.Computationalalleledesign,96-wellmodularvectorconstructionandhigh-efficiencygene-targetingstrategieshavebeencombinedtomutategenesonanunprecedentedscale.Sofar,morethan12,000vectorsand9,000conditionaltargetedalleleshavebeenproducedinhighly

germline-competentC57BL/6Nembryonicstemcells.High-throughputgenomeengineeringhighlightedbythisstudyisbroadlyapplicabletoratandhumanstemcellsandprovidesafoundationforfuturegenome-wideeffortsaimedatdecipheringthefunctionofallgenesencodedbythemammaliangenome.;基因定位修饰过程;利用小鼠干细胞进行基因打靶过程;嵌合体的传代杂交;输卵管移植;转基因与基因打靶比较;第三局部;DNA随机突???〔化学诱变，放射线诱变〕

转基因技术〔DNA片段基因组随机插入〕

小鼠全能干细胞发现和应用〔基因捕获〕

基因打靶〔DNA重组基因定位修饰〕

锌指核酸酶ZNF〔基因组定位切割修饰〕

TALEN〔基因组定位切割修饰〕

CRIPSR-Cas9〔基因组定位切割修饰〕;利用ZFN技术进行基因组修饰;ZFN工作原理;利用TALEN技术进行基因组修饰;TALEN工作原理;CRISPR/Cas9发现与应用进展;最初发现于bacteriaorarchaea，由protospacers和directrepeat序列顺序排列，可以转录成crRNA和tracrRNA两种小RNA。

Protospacers，DNAfragments(~2