副溶血性弧菌检验.pptx

中华人民共和国国家标准

GB4789.7—2013

食品安全国家标准

食品微生物学检验副溶血性弧菌检验

2014-06-01实施

2013-11-29发布

GB4789.7—2013

前言

本标准代替GB/T4789.7-2008《食品卫生微生物学检验副溶血性弧菌检验》。

本标准与GB/T4789.7-2008相比，主要变化如下：

——修改了标准的中文名称；

——修改了范围；

——修改了设备和材料；

——修改了培养基和试剂；

——修改了样品制备过程；

——修改了检验程序。

I

食品安全国家标准

食品微生物学检验副溶血性弧菌检验

1范围

本标准规定了食品中副溶血性弧菌(Vibrioparahaemolyticus)的检验方法。本标准适用于食品中副溶血性弧菌的检验。

2设备和材料

除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：

a)恒温培养箱：36℃±1℃；

b)冰箱：2℃~5℃、7℃~10℃；

c)恒温水浴箱：36℃±1℃；

d)均质器或无菌乳钵；

e)天平：感量0.1g；

f)无菌试管：18mm×180mm、15mm×100mm；

g)无菌吸管：1mL(具0.01mL刻度)、10mL(具0.1mL刻度)或微量移液器及吸头；

h)无菌锥形瓶：容量250mL、500mL、1000mL；

i)无菌培养皿：直径90mm；

j)全自动微生物生化鉴定系统；

k)无菌手术剪、镊子。

3培养基和试剂

3.13％氯化钠碱性蛋白胨水：见附录A中A.1。

3.2硫代硫酸盐-柠檬酸盐-胆盐-蔗糖(TCBS)琼脂：见附录A中A.2。

3.33％氯化钠胰蛋白胨大豆琼脂：见附录A中A.3。

3.43％氯化钠三糖铁琼脂：见附录A中A.4。

3.5嗜盐性试验培养基：见附录A中A.5。

3.63％氯化钠甘露醇试验培养基：见附录A中A.6。

3.73％氯化钠赖氨酸脱羧酶试验培养基：见附录A中A.7。

3.83％氯化钠MR-VP培养基：见附录A中A.8。

3.93％氯化钠溶液：见附录A中A.9。

3.10我妻氏血琼脂：见附录A中A.10。

3.11氧化酶试剂：见附录A中A.11。

3.12革兰氏染色液：见附录A中A.12。

3.13ONPG试剂：见附录A中A.13。

3.14Voges-Proskauer(V-P)试剂：见附录A中A.14。

3.15弧菌显色培养基。

GB4789.7—2013

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图1副溶血性弧菌检验程序

5操作步骤

5.1样品制备

5.1.1非冷冻样品采集后应立即置7℃~10℃冰箱保存，尽可能及早检验；冷冻样品应在45℃以下不超过15min或在2℃~5℃不超过18h解冻。

5.1.2鱼类和头足类动物取表面组织、肠或鳃。贝类取全部内容物，包括贝肉和体液；甲壳类取整个动物，或者动物的中心部分，包括肠和鳃。如为带壳贝类或甲壳类，则应先在自来水中洗刷外壳并甩干表面水分，然后以无菌操作打开外壳，按上述要求取相应部分。

GB4789.7—2013

3.16生化鉴定试剂盒。

4检验程序

副溶血性弧菌检验程序见图1。

筛选试验

氧化酶试验，革兰氏染色，3％氯化钠三糖铁琼脂，嗜盐性试验

TCBS或弧菌显色培养基

接种3%氯化钠碱性蛋白胨水3管，3个适宜的连续稀释度

挑取可疑菌落，接种于3％氯化钠胰蛋白胨大豆琼脂

样品25g(mL)+225mL3%氯化钠碱性蛋白胨水

生化试验或选用生化鉴定试剂盒或全自动微生物生化鉴定系统

血清学试验、神奈川试验

(选做项目)

结果与报告

36℃±1℃，18h~24h

36℃±1℃，18h~24h

36℃±1℃，8h~18h

36℃±1℃，8h~18h

定性

定量

2

GB4789.7—2013

5.1.3以无菌操作取样品25g(mL)，加入3%氯化钠碱性蛋白胨水225mL，用旋转刀片式均质器以8000r/min均质1min，或拍击式均质器拍击2min，制备成1:10的样品匀液。如无均质器，则将样品放入无菌乳钵，自225mL3%氯化钠碱性蛋白胨水中取少量稀释液加入无菌乳钵，样品磨碎后放入500mL无菌锥形瓶，再用少量稀释液冲