DB41∕T 1615-2018 食用菌菌丝纤维素酶、木聚糖酶、漆酶、蛋白酶活力检测技术规程.docxVIP

ICS65.020.20B05

DB41

河南省地方标准DB41/T1615—2018

食用菌菌丝纤维素酶、木聚糖酶、漆酶、蛋白酶活力检测技术规程

2018-06-19发布2018-09-19实施

河南省质量技术监督局发布

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DB41/T1615—2018

前言

本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。本标准由河南省农业科学院提出并归口。

本标准起草单位：河南省农业科学院植物营养与资源环境研究所。

本标准主要起草人：孔维丽、康源春、袁瑞奇、孔维威、张玉亭、胡素娟、刘芹。本标准参加起草人：段亚魁、宋志波、徐柯、崔筱、孟庆涛、韩玉娥。

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DB41/T1615—2018

食用菌菌丝纤维素酶、木聚糖酶、漆酶、蛋白酶活力检测技术规程

1范围

本标准规定了检测食用菌菌丝羧甲基纤维素酶、木聚糖酶、漆酶、蛋白酶活力的方法。

本标准适用于食用菌菌丝培养过程中羧甲基纤维素酶、木聚糖酶、漆酶、蛋白酶活力的定性检测。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T601—2016化学试剂标准滴定溶液的制备

GB/T6682—2008分析实验室用水规格和试验方法

GB/T9721—2006化学试剂分子吸收分光光度法通则(紫外和可见光部分)GB/T12728—2006食用菌术语

GBT23874—2009饲料添加剂木聚糖酶活力的测定

GB/T28715—2012饲料添加剂酸性、中性蛋白酶活力的测定分光光度法NY/T912—2004饲料添加剂纤维素酶活力的测定

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。3.1

羧甲基纤维素酶（CMC）活力单位

在37℃,pH值为5.5，每分钟从浓度为0.8%的羧甲基纤维素钠溶液中水解产生1mmol葡萄糖所需要的酶量为1个酶活力单位（U）。

3.2

木聚糖酶活力单位

在37℃,pH值为5.5，每分钟从浓度5mg/mL的木聚糖溶液中水解产生1μmol葡萄糖所需要的酶量为1个酶活单位（U）。

3.3

蛋白酶活力单位

在40℃,相应pH值（中性蛋白酶pH值=7.5，酸性蛋白酶pH值=3，碱性蛋白酶pH值=13）1min水解酪素产生1μg酪氨酸所需要的酶量为1个酶活力单位（U）。

3.4

漆酶活力单位

在室温（25℃~30℃),pH值为5（0.08mol/L醋酸钠缓冲液）条件下，每秒钟氧化1mmol的0.5mmol/L2,2′-联氮-双-3-乙基苯并噻唑-6-磺酸（ABTS），所需的酶量为1个酶活力单位（U）.

4仪器与设备

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DB41/T1615—2018

分光光度计，波长350nm～800nm;pH计:精度为0.01pH单位;

分析天平：精确至0.0001g和0.01g;数显恒温水浴锅:精度为±0.1℃;

磁力搅拌器：温度范围5℃~200℃;移液器：500μL～1000μL；

冰箱：0℃~20℃.

5试剂与溶液

5.1试剂与水

所用试剂均为分析纯，水为蒸馏水。

5.2羧甲基纤维素酶（CMC）测定试剂与溶液

按NY/T912—2004中5.1、5.2、5.3、5.4、5.4、5.6、5.7的规定配制。

5.3木聚糖酶测定试剂与溶液

按GBT23874—2009中4.1、4.2、4.3、4.4、4.5、4.6、4.7的规定配制。

5.4蛋白酶测定试剂与溶液

5.4.1碳酸钠溶液(Na2CO3)0.4mol/L

称取无水碳酸钠(Na2CO3)42.4g，用水溶解并定容至1000mL。5.4.2三氯乙酸(CCI3·COOH)0.4mol/L

称取三氯乙酸65.4g，用水溶解并定容至1000mL。

5.4.3氢氧化钠溶液(NaOH)0.5mol/L

按GB/T601—2016的规定配制。

5.4.4盐酸溶液(HCl)1mol/L及0.1mol/L

按GB/T601—2016的规定制备配制。

5.4.5磷酸缓冲液

称取磷酸氢二钠(Na2HP04·12H20)6.02g和磷酸二氢钠(NaH2PO4·2H20)0.50g，加水溶解并定容至

1000mL，用pH