DB12_T946-2020_饲料中氨基酸的测定离子交换色谱法_天津市.docxVIP

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65.120

DB12

B25

天津市地方标准

DB12/T946—2020

饲料中氨基酸的测定离子交换色谱法

Determinationofaminoacidsinfeeds-Ionexchangechromatography

天津市市场监督管理委员会

发布

DB12/T946—2020

前

言

本标准依据GB/T1.1-2009给出的规则起草。

本标准由天津市农业农村委员会提出并归口。

本标准起草单位：天津市畜牧兽医研究所。

本标准主要起草人：杨鸿雁、梁世岳、李玉鹏、陈龙宾、范寰、乔家运。

I

DB12/T946—2020

饲料中氨基酸的测定离子交换色谱法

1

范围

本标准规定了饲料中氨基酸的离子交换色谱法测定方法的原理、试剂和材料、仪器设备、样品的采

集与制备、测定步骤和结果计算。

本标准适用于饲料原料、配合饲料及浓缩饲料中氨基酸含量的测定。

2

规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文

件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T603化学试剂试验方法中所用制剂及制品的制备

GB/T6682

分析实验室用水规格和试验方法

GB/T14699.1饲料采样

GB/T20195动物饲料试样的制备

3

饲料中的蛋白质在盐酸的作用下，水解成单一氨基酸，经离子交换色谱法分离并以茚三酮柱后衍生

测定。水解中，色氨酸全部被破坏，不能测量，胱氨酸和蛋氨酸部分氧化，不能测准。

将饲料蛋白中的含硫氨基酸（胱氨酸和蛋氨酸）用过甲酸氧化，使之转变为对酸稳定的氧化物，再

饲料中的蛋白质在碱的作用下，水解出色氨酸，经离子交换色谱法分离并以茚三酮柱后衍生测定。

4

本标准所用试剂和水，在没有注明其它要求时，均指分析纯试剂和GB/T6682中规定的一级水；

所述溶液如未指明溶剂均系水溶液。试验中所需溶液、制剂及制品，在没有注明其它要求时均按GB/T603

1

DB12/T946—2020

4.6

4.7

甲酸：浓度为88%。

过甲酸溶液：将30%过氧化氢与甲酸按体积比1:9混合，室温放置1h，置冰水浴中冷却30min,

临用前配制。

4.8

盐酸溶液（7.2mol/L）：取盐酸600mL，用水稀释至1000mL，混匀。

4.9

氢氧化锂溶液（4mol/L）：称取一水合氢氧化锂167.8g，用水溶解并稀释至1000mL，混匀。

柠檬酸钠缓冲液：称取柠檬酸三钠14.71g、氯化钠2.92g和柠檬酸10.50g，溶于500mL水

4.10

中，加入硫二甘醇5mL和辛酸0.1mL，定容至1000mL。

4.11

4.12

4.13

氢溴酸（48%）：分析纯。

高纯氮气：纯度为99.999%。

氨基酸混合标准储备液：含L-天门冬氨酸、L-苏氨酸等17种常规水解分析用氨基酸，各组分浓

度均为2.50μmol/mL。

4.14

磺基丙氨酸-蛋氨酸砜标准储备液：准确称取磺基丙氨酸（纯度≥99.0%）105.7mg和蛋氨酸砜

（纯度≥99.0%）113.3mg，用水溶解并定容至250mL,浓度均为2.50μmol/mL，2℃～8℃保存，有效

期1年。

4.15

色氨酸标准储备液：准确称取色氨酸标准品（色谱纯）127.5mg，加少许水和数滴0.1mol/L

氢氧化钠溶液使之溶解，用水定容至250ml，浓度为2.50μmol/mL，2℃～8℃保存，有效期1年。

混合氨基酸标准工作液：准确吸取氨基酸混合标准储备液、磺基丙氨酸-蛋氨酸砜标准储备液和

4.16

色氨酸标准储备液各1mL，置于25mL容量瓶，用柠檬酸钠缓冲液定容，混匀，各氨基酸组分浓度均

为100nmol/mL，2℃～8℃保存，有效期3个月。

5

仪器设备

样品筛孔径0.18mm。

6

按GB/T14699.1采集样品；按GB/T20195制备样品，要求样品粉碎至过0.18mm孔径（80目）样品

7

称取试样30mg～70mg（约含蛋白质5mg～20mg，精确至0.1mg）于25mL水解管中，准确加入10

mL盐酸溶液，充氮气约1min后拧紧瓶盖，将水解管放入110℃±1℃恒温干燥箱，水解22h～24h。冷

却至室温，混匀。

2

DB12/T946—2020

7.1.2

氧化酸解法

称取试样50mg～100mg（约含蛋白质7.5mg～25mg，精确至0.1mg）于25mL水解管中，冰水浴

冷却30min后，加入已冷却的过甲酸溶液2mL，待样品湿润（勿摇），拧紧瓶盖，连同冰浴一起置于0℃～

4℃冰箱中，反应16h，加入0.3mL氢溴酸