DB45T 1682-2018 水牛胚胎质量检测技术规程.docxVIP

ICS65.020.30

B43

DB45

广西壮族自治区地方标准

DB45/T1682—2018

水牛胚胎质量检测技术规程

Detectionproceduresforqualityevaluationinembryosofwaterbuffalo

2018-03-25发布2018-04-25实施广西壮族自治区质量技术监督局发布

I

DB45/T1682—2018

目次

前言 II

1范围 1

2规范性引用文件 1

3术语和定义 1

4抽样和胚胎保存 1

5检测环境 2

6检测方法 2

7评定结果 3

附录A(规范性附录)试剂、耗材和设备 4

附录B(规范性附录)冷冻胚胎解冻方法 6

附录C(规范性附录)胚胎图片示例 7

II

DB45/T1682—2018

前言

本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。本标准由广西壮族自治区水产畜牧兽医局提出。本标准由广西畜牧业标准化技术委员会归口。

本标准起草单位：广西壮族自治区水牛研究所。

本标准主要起草人：郑海英、尚江华、杨春艳、黄加祥、郑威、梁贤威、鄢胜飞、李孟琪、于农淇、张秀芳、黄芬香。

DB45/T1682—2018

水牛胚胎质量检测技术规程

1范围

本标准规定了水牛胚胎质量检测术语与定义、抽样和胚胎保存、检测环境、检测方法与评定结果技术规程。

本标准适用于水牛体内或体外来源的新鲜胚胎和冷冻胚胎的质量检测。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。

GB/T5458液氮生物容器

GB/T18088出入境动物检疫采样

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

超低温保存cryopreservation

经特殊方法处理的胚胎放置在-196℃的超低温度中，使其新陈代谢暂时停止，从而将胚胎进行长期保存的一种方法。

3.2

胚胎解冻embryothawing

将冷冻保存的胚胎按一定的程序和方法在空气和水浴中解冻，并脱除冷冻保护剂，使胚胎恢复正常的形态和新陈代谢的过程。

3.3

胚胎体外培养embryoinvitroculture

在模拟体内子宫环境和条件下，胚胎在体外继续发育的过程。

4抽样和胚胎保存

4.1抽样

应符合GB/T18088的要求。

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4.2胚胎保存

胚胎应保存在-196℃的液氮容器中，容器应符合GB/T5458的规定。取放胚胎时，在空气中暴露时间不能超过10s。胚胎保存期间，要定期检查容器中液氮消耗情况，适时补充液氮，确保保存胚胎的细管在液氮液面以下。

4.3信息记录

抽样时，应详细记录保存胚胎细管上标记的完整信息。

5检测环境

洁净无菌环境。

6检测方法

6.1系谱资料

待检胚胎应有完整的系谱资料(适用于体内胚胎和体外胚胎)。

6.2标识

保存胚胎的细管应有明确的标记，标记内容应包括品种、公母牛编号、胚胎数量、胚胎发育阶段、胚胎质量级别、生产日期、生产单位等，标记上的字迹清晰、完整、准确，并做好存放记录。

6.3试剂、耗材和设备

参见附录A。

6.4胚胎质量检测方法

6.4.1胚胎的形态学检测

借助于体视显微镜对胚胎的发育阶段和状况进行形态学观察。

6.4.2胚胎的体外发育能力评判

将胚胎置于38℃~39℃、5%CO?和100%最大饱和湿度的环境下培养，并于开始培养后24h和48h分别观察胚胎的存活和发育情况。冷冻胚胎应按照程序要求进行解冻后检测，胚胎解冻程序参见附录B。

6.5胚胎质量检测内容6.5.1胚胎发育阶段

6.5.1.1桑椹胚

受精后第4d~5d的胚胎，能观察到球状的细胞团，分裂球间隙不明显，占据透明带内腔的50%~

60%。

3

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6.5.1.2致密桑椹胚

受精后第5d~6d的胚胎，细胞团变小，卵裂球之间界限难以分辨，细胞团与透明带之间空隙明显增大，占透明带内腔的60%～70%。

6.5.1.3早期囊胚

受精后第6d~7d的胚胎，内细胞团的一部分出现囊胚腔，但难以分清内细胞团和滋养